HRS对小型猪腹腔镜肝IRI合并肝部分切除术细胞凋亡影响的研究

发布时间：2020-11-04 15:43

　　 腹腔镜手术创口小、疼痛轻、术后恢复快,其安全性、可行性在肝脏外科中已经验证。然而,腹腔镜肝切除手术同样会发生肝脏缺血再灌注损伤,有效防止肝脏缺血再灌注损伤是肝脏外科领域亟待解决的问题。肝脏缺血再灌注损伤的保护性研究多数局限于兔、鼠等实验动物模型,目前的模型还不能完全模拟腹腔镜手术操作环境,建立腹腔镜环境下肝损伤模型是进行深入研究的前提。氢气是一种天然的抗氧化剂,可选择性清除氧自由基,对组织器官具有保护作用。因此,本课题建立小型猪腹腔镜肝脏缺血再灌注合并肝部分切除损伤模型,探究富氢生理盐水(HRS)对术后肝细胞凋亡的影响。本研究随机将18头小型猪分为假手术组(Sham组)、模型组(IRI组)、HRS干预组(HRS组)。Sham组仅建立手术通路、气腹、翻动肝叶;IRI组建立右半肝缺血60 min合并左半肝切除损伤模型;HRS组手术操作同IRI组并通过肝门静脉于再灌注前10 min、术后1 d、2 d、3 d注射HRS(10 mL/kg)。分别在术前、术后即刻、1 d、3 d、7 d采集肝组织样本和血液样本。试剂盒检测肝功能指标的变化,实时荧光定量PCR和Western Blot技术检测Bax、Bcl-2、Fas、Fasl mRNA转录水平和蛋白表达量,试剂盒检测肝组织中Caspase-3、8、9活性,TUNEL法测定肝细胞凋亡指数(AI),透射电镜观察肝细胞超微结构的变化。本研究顺利地完成各组手术,术后恢复良好。(1)肝功能检测结果:与Sham组比较,IRI组和HRS组术后即刻、1 d、3 d ALT、AST水平明显升高(P0.05或P0.01),术后1 d、3 d TBIL水平明显升高(P0.01);HRS组与IRI组比较,术后1 d、3 d ALT、TBIL水平明显降低(P0.05或P0.01),术后即刻、1 d、3 d AST水平明显降低(P0.05或P0.01)。(2)肝细胞凋亡指数结果:与Sham组比较,IRI组和HRS组术后即刻、1 d、3 d凋亡指数明显增加(P0.05或P0.01);HRS组与IRI组比较,术后1 d、3 d凋亡指数明显降低(P0.05)。(3)肝细胞超微结构的变化:与Sham组比较,IRI组和HRS组肝组织超微结构变化明显,HRS组损伤程度较IRI组减轻。(4)凋亡相关因子mRNA转录与蛋白表达结果:与Sham组比较,IRI组和HRS组术后即刻、1 d Bax mRNA转录量和蛋白表达量明显升高(P0.05或P0.01),Bcl-2 mRNA转录量和蛋白表达量明显降低(P0.05或P0.01),在术后即刻、1 d、3 d Bax/Bcl-2 mRNA比值或蛋白比值明显升高(P0.05或P0.01);HRS组与IRI组比较,术后即刻、1 d Bax mRNA转录量和蛋白表达量明显降低(P0.05或P0.01),Bcl-2 mRNA转录量和蛋白表达量明显升高(P0.05或P0.01),Bax/Bcl-2 mRNA比值或蛋白比值明显降低(P0.01)。与Sham组比较,IRI组和HRS组术后即刻、1 d Fas mRNA转录量和蛋白表达量明显升高(P0.05或P0.01),术后1 d、3 d Fasl mRNA转录量和蛋白表达量明显升高(P0.05或P0.01);HRS组与IRI组比较,术后1 d、3 d Fas mRNA转录量和蛋白表达量明显降低(P0.05或P0.01),术后1 d、3 d Fasl mRNA转录量和蛋白表达量明显降低(P0.05)。(5)Caspase活性检测结果:与Sham组比较,IRI组术后1 d、3 d Caspase-3、8、9活性明显升高(P0.01),HRS组术后1 d Caspase-3、9活性明显升高(P0.01);HRS组与IRI组比较,术后1 d、3 d Caspase-3、8活性明显降低(P0.05或P0.01),术后即刻、1d Caspase-9活性明显降低(P0.05或P0.01)。综上所述,得出下列结论:(1)HRS可促进术后肝功能的恢复,对小型猪腹腔镜肝脏缺血再灌注合并肝部分切除损伤具有保护作用。(2)HRS可减少小型猪腹腔镜肝脏缺血再灌注合并肝部分切除损伤中肝细胞凋亡的数目,具有抑制细胞凋亡的作用。(3)在小型猪腹腔镜肝脏缺血再灌注合并肝部分切除损伤中,HRS通过下调Bax、Fas、Fasl mRNA和蛋白表达,升高Bcl-2 mRNA和蛋白表达,并通过降低Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性,发挥其抑制细胞凋亡的作用。
【学位单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R657.3;R-332
【部分图文】：

图 2-1 手术通路的建立Fig. 2-1 Establishment of operation pathway法 60 min分离断肝脏左右三角韧带、肝圆韧带、镰状韧离钳和左弯分离钳使肝实质与胆囊管、胆囊动实质中间穿过一根自制带针止血带，同时贯穿基部（如图 2-3）；停止右半肝供血 60 min(如图肝血流同时实施左半肝切除。管半肝缺血期间将中央静脉导管插入门静脉。在第静脉穿刺导管顺入腹腔，用空心注射器将肝素生，确定合适的穿刺位点（尽量靠近远心端）并刺端顺入导丝，成功将导丝进入肝门静脉 4 cm 左穿刺导管。将 16 G 中心静脉导管顺着导丝送退出导丝（如图 2-6），调整导管在腹腔内的长适度。体外连接好导管接头和肝素帽，向导管

材料与方法割线离断肝实质（如图 2-9），将整个左半肝全部切除，切除后检查断面有无出血点（如图10）。用电凝球对断面渗血处止血。（4）离断肝叶的取出腹腔内用术前准备的温生理盐水冲洗后，通过 10 mm 套管把消毒处理的样本袋送入腹腔，将离断的左半肝组织、止血带及双孔卡扣放进样本袋内，扩大腹壁切口，将样本袋取出（5）缝合切口在腹底 10 mm 套管处置入 1 根腹腔引流管，体外固定。腹壁切口常规缝合并用碘酊消毒（6）HRS 注射时间点HRS 干预组分别在再灌注前 10 min、术后 1 d、2 d、3 d 经门静脉中心静脉导管注射 HR10 mL/kg）。

材料与方法割线离断肝实质（如图 2-9），将整个左半肝全部切除，切除后检查断面有无出血点（如图10）。用电凝球对断面渗血处止血。（4）离断肝叶的取出腹腔内用术前准备的温生理盐水冲洗后，通过 10 mm 套管把消毒处理的样本袋送入腹腔，将离断的左半肝组织、止血带及双孔卡扣放进样本袋内，扩大腹壁切口，将样本袋取出（5）缝合切口在腹底 10 mm 套管处置入 1 根腹腔引流管，体外固定。腹壁切口常规缝合并用碘酊消毒（6）HRS 注射时间点HRS 干预组分别在再灌注前 10 min、术后 1 d、2 d、3 d 经门静脉中心静脉导管注射 HR10 mL/kg）。
【参考文献】

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本文编号：2870286