西尼罗病毒对人神经母细胞瘤细胞p38丝裂原活化蛋白激酶途径的调控

发布时间：2020-11-08 09:21

　　 目的探讨西尼罗病毒(WNV)感染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y后对p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径的影响,以及该途径在WNV复制及应激应答、炎性应答相关分子表达调控中的作用。方法 WNV分别短时孵育(5、15、30、60 min)和感染(12、24、48、60 h)SH-SY5Y细胞,用蛋白质印迹法检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK表达,用qRT-PCR检测WNV感染细胞内C/EBP同源蛋白(CHOP)、白细胞介素6(IL-6)、活化转录因子6α(ATF6α)和干扰素刺激基因15(ISG15)mRNA表达水平的动态变化。用WNV感染p38 MAPK siRNA转染的SH-SY5Y细胞,用qRT-PCR检测WNV RNA水平及CHOP、IL-6、ATF6α和ISG15mRNA水平。结果与未孵育的细胞相比,WNV短时孵育细胞内p38 MAPK的磷酸化水平升高。WNV感染SH-SY5Y细胞12 h、24 h时激活了p38 MAPK途径,而感染48 h、60 h时明显抑制了p38 MAPK途径。WNV感染促进了CHOP、IL-6和ISG15 mRNA表达而抑制了ATF6αmRNA表达。与对照siRNA转染的细胞相比,p38MAPKsiRNA转染的细胞内WNVRNA(P0.05)水平和ATF6αmRNA(P0.01)水平升高,而CHOP mRNA水平降低(P0.05)。结论 WNV感染早期激活了p38 MAPK途径,该途径的激活可能负反馈调控WNV的复制。WNV经p38 MAPK途径调控与应激应答相关的CHOP、ATF6α表达及与炎性应答相关的IL-6表达。
【部分图文】：

WNV感染细胞内p38 MAPK磷酸化的变化

q RT-PCR检测结果（图5）显示，与未转染的细胞相比，p38 MAPK si RNA转染细胞内IL-6(P<0.05）、ATF6α（P<0.01)m RNA水平升高；与对照si RNA转染的细胞相比，p38 MAPK s i R N A转染细胞内ATF6αm R N A水平升高（P<0.01）、CHOP m RNA水平降低（P<0.05);ISG15 m R NA水平在各组差异无统计学意义。结果表明，WNV感染差异调控SH-SY5Y细胞内CHOP、IL-6、ATF6α和ISG15的表达；W NV可经p38 MAPK途径调控与应激应答相关的CHOP、ATF6α表达和与炎性应答相关的IL-6表达。图4 WNV感染诱生SH-SY5Y细胞内相关分子m RNA表达的动态变化

图3 WNV在敲低p38 MAPK表达的SH-SY5Y细胞内复制图5 敲低p38 MAPK表达对WNV调控SH-SY5Y细胞内相关分子m RNA表达的影响
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