细胞工厂中F基因型腮腺炎病毒SP-A株在人二倍体细胞上的增殖研究

发布时间：2020-11-12 09:50

　　目的利用细胞工厂,探讨F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB_(17)细胞上的增殖特性,为腮腺炎疫苗的研制提供基础数据。方法分别以体积分数为10%、8%和5%的血清浓度将细胞培养至单层后,观察病毒接种后细胞病变情况,初步确定最低血清含量后;在不含血清培养基条件下,按照不同接种感染复数(multiplicity of infection, MOI)接种细胞,确定病毒增殖峰值后,进一步观察不同吸附条件对病毒增殖的影响;同时进行荧光实时定量PCR,验证病毒增殖变化。结果在体积分数为5%的血清条件下,细胞可生长成致密单层;高MOI(0.500)感染细胞后,在4～5 d内进入增殖高峰,中MOI(0.050)、低MOI(0.005)感染细胞后,在5～6 d进入增殖高峰,维持48 h后,呈现缓慢下降趋势;在比较37℃吸附试验中,非吸附组病毒增殖高峰明显迟于吸附组,荧光实时定量PCR检测结果显示在病毒感染细胞6 d时病毒载量达到峰值。结论 5%新生牛血清即可获得生长状态良好的细胞,MOI对腮腺炎病毒在KMB_(17)细胞株中的增殖有较大的影响,当使用适宜范围的MOI(0.01～0.02),在非吸附的条件下,腮腺炎病毒SP-A株在KMB_(17)株中能够良好地增殖,在病毒培养至7～9 d可获得高滴度的病毒收获液。
【部分图文】：

细胞,血清,情况,单层

在体积分数分别为10%和8%血清条件下细胞生长成致密单层时间较快,36～48 h已经形成细胞单层,60～64 h形成致密单层;在5%血清条件下,细胞在48～54 h细胞形成单层,68～72 h细胞形成致密单层。细胞形态呈梭状特征,界限清晰,排列整齐,细胞立体感和折光性均较好,见图1。在体积分数5%血清条件下,MOI为0.200接种细胞时,在感染3～5 d出现40%～50%圆缩,但基本无细胞脱落。至7 d时,细胞圆缩现象大幅度增加,并有较多的细胞脱落。当MOI从0.020逐渐减少到0.002时,细胞感染变化逐渐减弱,培养至3～5 d时有20%～30%细胞脱落;至5～7 d时细胞脱落40%～50%;至8～10 d时细胞脱落达到70%～80%,培养液上清中有大量死细胞,见图2。

病毒,细胞,情况,高峰

使用体积分数为10%的血清作为培养基培养细胞后,在无血清培养维持条件下较早的出现病毒增殖高峰,时间为感染后3～5 d,同样在无血清培养维持条件下使用8%和5%血清培养细胞组,出现病毒增殖时间相近,大致在感染细胞后5～7 d出现病毒增殖高峰。高MOI(0.500)感染细胞后,能在4～5 d病毒进入增殖高峰,并于7 d后以较快速度呈下降趋势。中(0.050)、低(0.005)MOI感染细胞后,在5～6 d进入增殖高峰,维持48 h后,呈现缓慢下降趋势,见图3。图3 不同血清含量培养细胞接种不同MOI后病毒增殖变化

病毒,细胞,血清