过表达SCD1对骨髓间质干细胞成骨分化的影响及其基因表达谱变化研究

发布时间：2020-11-17 10:14

　　 目的:研究固醇辅酶A去饱和酶1(SCD1)过表达后对骨髓间质干细胞(BM-MSCs)成骨分化作用的影响,并利用基因芯片技术分析基因表达谱的变化。方法:利用已构建成功的SCD1慢病毒转染BM-MSCs,采用RT-PCR及C14技术检测SCD1在BM-MSCs中过表达情况及其活性。成骨诱导培养BM-MSCs后,采用Western blot和茜素红染色技术检测骨钙素(OC)等相关成骨指标,进一步运用全基因芯片检测过表达SCD1对BM-MSCs成骨分化表达谱的影响。结果:SCD1在BM-MSCs中成功过表达,过表达组SCD1活性明显高于对照组。成骨诱导7天、14天时,过表达组中的碱性磷酸酶(APL)活性和骨钙素水平均明显高于对照组(P0.05)。成骨诱导一周、两周时,过表达组的碱性磷酸酶染色和茜素红染色均多于对照组。基因表达芯片的结果显示,过表达SCD1改变骨髓间质干细胞表达谱,检测出差异基因2896个。基因通路分析提示干扰素通路为表达差异最显著通路(P0.05)。结论:过表达SCD1可以促进BM-MSCs的成骨分化,可能通过作用于干扰素通路影响成骨分化功能。这一发现可能为骨折愈合提供重要的思路和潜在治疗策略,值得深入研究。
【部分图文】：

荧光染色结果（图1A,B）和流式细胞仪分析结果(图1C)表明SCD1慢病毒转染率达94.0%，有效。RT-PCR检测结果显示，与空载组相比，BM-MSCs在转染SCD1慢病毒后，其SCD1 m RNA表达明显上调（表2,P<0.05）。C14硬脂酸/C14软脂酸转化检测表明，较于空载组，成功转染的SCD1活性明显增高（表2,P<0.05）。

我们运用IPA分析差异基因在疾病与功能分类中的富集情况，以深入研究SCD1过表达对骨髓间充质干细胞基因表达的影响。分析结果表明，这些差异表达基因主要参与了细胞分化的生物学功能（表4）。图3 茜红素染色结果(过表达组：B D,对照组：A C)

茜红素染色结果(过表达组：B D,对照组：A C)
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