PA1在小鼠睾丸发育阶段的表达及其在支持细胞中的功能研究
发布时间：2020-12-04 18:57
目的哺乳动物精子的发生是一个极其复杂精细的过程,支持细胞作为生精小管中唯一的体细胞,不仅起着结构上的支持作用,更发挥着营养和调节的作用。最新进展表明,组蛋白甲基化修饰在基因活性的调节中扮演着重要的角色。组蛋白H3K4甲基化由组蛋白甲基转移酶（Histone Methyltransferases,HMTs）介导催化,与基因的转录激活相关。PTIP相关蛋白1（PTIP associated protein 1,PA1）是H3K4甲基转移酶的核心组件,自从2007年被发现以后就一直备受关注,然而PA1在男性生殖系统中的表达及功能仍不清楚。为了探究PA1在男性生殖中的作用,我们首先观察了PA1在小鼠睾丸不同发育阶段的表达和定位;然后通过条件性基因敲除的方法获得了支持细胞特异性Pa1敲除（Sertoli cell specific Pa1 knock out,SC-PA1KO）鼠,并对敲除鼠的生殖表型进行了观察,最后对支持细胞中Pa1敲除引起雄性不育的机制进行了初步探索。方法1.选取不同年龄段小鼠,采用逆转录聚合酶链式反应（Reverse transcriptionpolymerase chai...
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1.支持细胞-支持细胞以及支持细胞-生精细胞细胞连接示意图
图 2. 组蛋白 H3K4 甲基转移酶复合体结构示意图类 PA1 蛋白包含了 254 个氨基酸，并且没有可识别的保守结构域[58]。而小白包含了 253 个氨基酸，和人类 PA1 有 87%的氨基酸结构相同[56]。理论上分子量大小为 28 KD，然而，可能由于其等电点较低，仅有 4.4，因此其在 S泳上显示的条带位于 42 KD[56]。ST pull-down assay 显示 PA1 和 PTIP 之间存在直接作用，通过 PA1 可以对 P纯[56]。由于 PTIP 是一个由 6 个串联 BRCT 结构域组成的蛋白，每个 BR都有与PA1相互作用的可能[56]。Zihua Gong等采用了基因敲除的手段，将P的 6 个 BRCT 结构域分别进行敲除后观察，当 PTIP 的第二个 BRCT 结构域他们发现 PA1 的汇集戏剧般的降低了，作者在接下来的实验中进一步发现接相互作用的是 PA1 的 N 端，而不是 C 端[59]。同时他们也在实验中发现除的 U2OS 细胞，在 DNA 损伤区无法发生 PA1 的汇集，然而当他们单独 后，PTIP 却可以在 DNA 损伤区域正常汇集，这个现象说明了 PTIP 可以
图 3. PA1 对 DNA 电离损伤后的修复示意图功能他们的实验中发现，Pa1 敲除后的胚胎表现出，然而其发育会停止在第 4-5 原节阶段，同时其羊膜及绒毛膜均不同程度的表现出异常，并且胎儿出生。这一点和 Hongbing Zhang 对于 BM步研究发现，Pa1 敲除的胚胎其 BMP2 表达显胚胎发育畸形是由于 BMP2 的表达受到影响作用机制尚有待进一步研究[65]。类别转换重排（class switch recombination, CSR）能产生多样性。免疫球蛋白重链（IgH）基因的转录由含 B体调控，作用于 CSR 相关联的 DNA 损伤区域
本文编号：2898083
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1.支持细胞-支持细胞以及支持细胞-生精细胞细胞连接示意图
图 2. 组蛋白 H3K4 甲基转移酶复合体结构示意图类 PA1 蛋白包含了 254 个氨基酸，并且没有可识别的保守结构域[58]。而小白包含了 253 个氨基酸，和人类 PA1 有 87%的氨基酸结构相同[56]。理论上分子量大小为 28 KD，然而，可能由于其等电点较低，仅有 4.4，因此其在 S泳上显示的条带位于 42 KD[56]。ST pull-down assay 显示 PA1 和 PTIP 之间存在直接作用，通过 PA1 可以对 P纯[56]。由于 PTIP 是一个由 6 个串联 BRCT 结构域组成的蛋白，每个 BR都有与PA1相互作用的可能[56]。Zihua Gong等采用了基因敲除的手段，将P的 6 个 BRCT 结构域分别进行敲除后观察，当 PTIP 的第二个 BRCT 结构域他们发现 PA1 的汇集戏剧般的降低了，作者在接下来的实验中进一步发现接相互作用的是 PA1 的 N 端，而不是 C 端[59]。同时他们也在实验中发现除的 U2OS 细胞，在 DNA 损伤区无法发生 PA1 的汇集，然而当他们单独 后，PTIP 却可以在 DNA 损伤区域正常汇集，这个现象说明了 PTIP 可以
图 3. PA1 对 DNA 电离损伤后的修复示意图功能他们的实验中发现，Pa1 敲除后的胚胎表现出，然而其发育会停止在第 4-5 原节阶段，同时其羊膜及绒毛膜均不同程度的表现出异常，并且胎儿出生。这一点和 Hongbing Zhang 对于 BM步研究发现，Pa1 敲除的胚胎其 BMP2 表达显胚胎发育畸形是由于 BMP2 的表达受到影响作用机制尚有待进一步研究[65]。类别转换重排（class switch recombination, CSR）能产生多样性。免疫球蛋白重链（IgH）基因的转录由含 B体调控，作用于 CSR 相关联的 DNA 损伤区域
本文编号：2898083
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