活化的Treg细胞对NKT细胞迁移的调节作用
发布时间：2020-12-08 20:02
目的探讨Treg细胞活化后对NKT细胞迁移的调控作用。方法分离纯化小鼠脾脏Treg细胞及NKT细胞后,通过病毒感染的方式制备Foxp3修饰的Treg细胞;验证Treg细胞的活化情况。体外共培养活化的Treg细胞和NKT细胞,流式细胞仪检测NKT的数量; RT-PCR及ELISA分析NKT细胞胞内因子的分泌水平（IL-4、IFN-γ）。制备卵清白蛋白（OVA）致敏哮喘小鼠模型,体内观察Foxp3修饰的Treg细胞对NKT细胞体内迁移的影响。结果经Foxp3修饰后的Treg细胞（Le-Foxp3组）中Foxp3的表达明显增加; CFSE标记法检测显示Le-Foxp3组细胞可显著抑制自体CD4+CD25-T效应T细胞的增殖;同时ELISA检测结果显示相较于空载体转染组（Le-scr组）,Le-Foxp3组细胞上清液中IL-10及TGF-β的水平显著升高。经transwell培养板体外共培养Treg细胞和NKT细胞后,流式细胞仪检测下室中NKT细胞的数目结果显示Le-Foxp3组为（221.15±79.36）,Le-scr组为（649.38±153.97）;同时IL-4及IFN-γ的水平显著下...
【文章来源】：中华肺部疾病杂志(电子版). 2019年05期 第601-605页
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
表达Foxp3对Treg细胞功能的影响;注:A:CFSE标记法检测Treg细胞对Teff细胞的增殖抑制作用;B:ELISA检测细胞因子IL-10和TGF-β的水平
细胞由Le-scr组的649．38±153．97减少至221．15±79．36(P＜0．05)。ＲT-PCＲ和ELISA检测培养上清中IL-4和IFN-γ的水平，结果显示(图3):相较于Le-scr组，Le-Foxp3组共培养体系上清液中IL-4和IFN-γ的水平显著降低，差异具有统计学意义。图2表达Foxp3对Treg细胞功能的影响;注:A:CFSE标记法检测Treg细胞对Teff细胞的增殖抑制作用;B:ELISA检测细胞因子IL-10和TGF-β的水平图3ＲT-PCＲ(A)和ELISA(B)检测表达Foxp3的Treg细胞对NKT细胞胞内因子IL-4和IFN-γ分泌的影响四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响本实验进一步引入OVA致哮喘小鼠模型，检测哮喘发病过程中表达Foxp3后Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响。结果显示(图4)，相较于OVA组，OVA+Le-Foxp3组小鼠肺组织中NKT的数量显著降低，而外周血及脾脏中NKT的数量显著升高。因实验过程中发现，OVA组和OVA+Le-scr组结果不具有显著差异，故结果中未显示OVA+Le-scr组数据。图4OVA哮喘模型中Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响讨论本文首先检测了体外构建的Foxp3病毒载体的转染效率，结果显示Treg细胞中转入Foxp3病毒载体后Foxp3的表达显著升高，证明所构建的载体可用于后续实验。Foxp3是Treg细胞的特征标志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表达的Foxp3与Treg细胞免疫抑制功能之间有良好的相关性［13-14］。本文进一步检测了直接通过病毒载体表达Foxp3对Treg细胞功能的影响。结果?
?Treg细胞对NKT细胞胞内因子IL-4和IFN-γ分泌的影响四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响本实验进一步引入OVA致哮喘小鼠模型，检测哮喘发病过程中表达Foxp3后Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响。结果显示(图4)，相较于OVA组，OVA+Le-Foxp3组小鼠肺组织中NKT的数量显著降低，而外周血及脾脏中NKT的数量显著升高。因实验过程中发现，OVA组和OVA+Le-scr组结果不具有显著差异，故结果中未显示OVA+Le-scr组数据。图4OVA哮喘模型中Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响讨论本文首先检测了体外构建的Foxp3病毒载体的转染效率，结果显示Treg细胞中转入Foxp3病毒载体后Foxp3的表达显著升高，证明所构建的载体可用于后续实验。Foxp3是Treg细胞的特征标志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表达的Foxp3与Treg细胞免疫抑制功能之间有良好的相关性［13-14］。本文进一步检测了直接通过病毒载体表达Foxp3对Treg细胞功能的影响。结果发现表达Foxp3可提高Treg细胞对Teff细胞的增殖抑制率，同时促进Treg细胞分泌细胞因子IL-10和TGF-β。结果提示通过体外构建Foxp3表达载体可直接活化Treg细胞，促进其功能的发挥。早期有研究提示Treg细胞及NKT细胞在哮喘发病过程中存在相互调控作用［10-11］。故而本实验通过体外共培养Treg细胞和NKT细胞，研究Treg细胞对NKT细胞功能的影响。Transwell共培养的结果显示，转染Foxp3后，迁移到下室的NKT细胞数量明显减少，提示活化的Treg细胞可抑制NK
【参考文献】：
期刊论文
[1]NKT细胞与调节性T细胞在免疫调节中相互作用的研究进展[J]. 何青,聂汉祥,杨巧玉,刘琳琳. 免疫学杂志. 2016(06)
[2]特异性免疫治疗对屋尘螨致敏哮喘小鼠NKT细胞的影响[J]. 卢燕鸣,曹兰芳,李琛,赵瑜,陈伟,张文明. 现代生物医学进展. 2012(07)
[3]支气管哮喘儿童急性发作期诱导痰液T细胞亚群及自然杀伤T细胞的变化[J]. 惠郁,王晓明,周韵娇. 中华哮喘杂志(电子版). 2010(01)
[4]支气管哮喘患儿外周血自然杀伤T淋巴细胞的变化及临床意义[J]. 卢燕鸣,曹兰芳,薛海燕,李亚琴,李琛,赵瑜. 中华实用儿科临床杂志. 2013 (10)
本文编号：2905607
【文章来源】：中华肺部疾病杂志(电子版). 2019年05期 第601-605页
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
表达Foxp3对Treg细胞功能的影响;注:A:CFSE标记法检测Treg细胞对Teff细胞的增殖抑制作用;B:ELISA检测细胞因子IL-10和TGF-β的水平
细胞由Le-scr组的649．38±153．97减少至221．15±79．36(P＜0．05)。ＲT-PCＲ和ELISA检测培养上清中IL-4和IFN-γ的水平，结果显示(图3):相较于Le-scr组，Le-Foxp3组共培养体系上清液中IL-4和IFN-γ的水平显著降低，差异具有统计学意义。图2表达Foxp3对Treg细胞功能的影响;注:A:CFSE标记法检测Treg细胞对Teff细胞的增殖抑制作用;B:ELISA检测细胞因子IL-10和TGF-β的水平图3ＲT-PCＲ(A)和ELISA(B)检测表达Foxp3的Treg细胞对NKT细胞胞内因子IL-4和IFN-γ分泌的影响四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响本实验进一步引入OVA致哮喘小鼠模型，检测哮喘发病过程中表达Foxp3后Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响。结果显示(图4)，相较于OVA组，OVA+Le-Foxp3组小鼠肺组织中NKT的数量显著降低，而外周血及脾脏中NKT的数量显著升高。因实验过程中发现，OVA组和OVA+Le-scr组结果不具有显著差异，故结果中未显示OVA+Le-scr组数据。图4OVA哮喘模型中Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响讨论本文首先检测了体外构建的Foxp3病毒载体的转染效率，结果显示Treg细胞中转入Foxp3病毒载体后Foxp3的表达显著升高，证明所构建的载体可用于后续实验。Foxp3是Treg细胞的特征标志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表达的Foxp3与Treg细胞免疫抑制功能之间有良好的相关性［13-14］。本文进一步检测了直接通过病毒载体表达Foxp3对Treg细胞功能的影响。结果?
?Treg细胞对NKT细胞胞内因子IL-4和IFN-γ分泌的影响四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响本实验进一步引入OVA致哮喘小鼠模型，检测哮喘发病过程中表达Foxp3后Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响。结果显示(图4)，相较于OVA组，OVA+Le-Foxp3组小鼠肺组织中NKT的数量显著降低，而外周血及脾脏中NKT的数量显著升高。因实验过程中发现，OVA组和OVA+Le-scr组结果不具有显著差异，故结果中未显示OVA+Le-scr组数据。图4OVA哮喘模型中Treg细胞对NKT细胞体内分布的影响讨论本文首先检测了体外构建的Foxp3病毒载体的转染效率，结果显示Treg细胞中转入Foxp3病毒载体后Foxp3的表达显著升高，证明所构建的载体可用于后续实验。Foxp3是Treg细胞的特征标志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表达的Foxp3与Treg细胞免疫抑制功能之间有良好的相关性［13-14］。本文进一步检测了直接通过病毒载体表达Foxp3对Treg细胞功能的影响。结果发现表达Foxp3可提高Treg细胞对Teff细胞的增殖抑制率，同时促进Treg细胞分泌细胞因子IL-10和TGF-β。结果提示通过体外构建Foxp3表达载体可直接活化Treg细胞，促进其功能的发挥。早期有研究提示Treg细胞及NKT细胞在哮喘发病过程中存在相互调控作用［10-11］。故而本实验通过体外共培养Treg细胞和NKT细胞，研究Treg细胞对NKT细胞功能的影响。Transwell共培养的结果显示，转染Foxp3后，迁移到下室的NKT细胞数量明显减少，提示活化的Treg细胞可抑制NK
【参考文献】：
期刊论文
[1]NKT细胞与调节性T细胞在免疫调节中相互作用的研究进展[J]. 何青,聂汉祥,杨巧玉,刘琳琳. 免疫学杂志. 2016(06)
[2]特异性免疫治疗对屋尘螨致敏哮喘小鼠NKT细胞的影响[J]. 卢燕鸣,曹兰芳,李琛,赵瑜,陈伟,张文明. 现代生物医学进展. 2012(07)
[3]支气管哮喘儿童急性发作期诱导痰液T细胞亚群及自然杀伤T细胞的变化[J]. 惠郁,王晓明,周韵娇. 中华哮喘杂志(电子版). 2010(01)
[4]支气管哮喘患儿外周血自然杀伤T淋巴细胞的变化及临床意义[J]. 卢燕鸣,曹兰芳,薛海燕,李亚琴,李琛,赵瑜. 中华实用儿科临床杂志. 2013 (10)
本文编号：2905607
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/2905607.html
