抗人N端脑钠肽前体抗原表位分析及单克隆抗体的研制

发布时间：2020-12-12 01:33

　　目的:制备并鉴定特异性抗人N端脑钠肽前体（NT-proBNP）抗原表位的单克隆抗体。方法:通过Bepipred在线表位预测方法和Epitope Prediction System软件预测人NT-proBNP B细胞抗原表位,综合2种预测结果对比优化选取合适的2个表位肽段P1和P2,偶联KLH为免疫原,免疫BALB/c小鼠,选择血清效价较高的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合;经HAT筛选,间接ELISA法检测和有限稀释法进行亚克隆,得到阳性杂交瘤细胞株;采用体内诱生法制备腹水并用Protein G柱纯化抗体;经鉴定,对特异性最好的2株进行纯度、效价、亚型及亲和力的分析。结果:通过P2-KLH免疫获得的阳性杂交瘤细胞株1F9和P1-KLH免疫获得的阳性杂交瘤细胞株4H2能稳定分泌抗NT-proBNP单克隆抗体,纯度较高,能与NT-proBNP重组蛋白特异性结合,效价分别达到4×104、4×105,抗体亚型均为IgG1,相对亲和力常数分别为1.14×107和1.6×107L/mol。结论:获得2株特性良好的单克隆抗体,可为下一步研制NT-proBNP检测试剂盒提供原材料。 

【文章来源】：生物技术通讯. 2019年06期 第762-767页

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

Bepipred预测表位结果

Epitope Prediction System预测表位结果

间接ELISA法检测P1-KLH、P2-KLH免疫的小鼠血清效价分别达12 800、6400。通过P1-KLH完全抗原免疫获得6株可分泌NT-proBNP抗体的细胞株2D5、2C8、2E1、4B9、4D3、4H2；通过P2-KLH完全抗原免疫获得2株阳性杂交瘤细胞株1F9、5B5。对抗体进行鉴定，从P2和P1表位肽获得的抗体中选择特异性最好的1F9和4H2分别进行特性分析。2.4 单克隆抗体特性鉴定

【参考文献】：
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本文编号：2911606