Notch-CSL/RBP-J信号途径在同种异基因免疫应答中的作用及分子机制
发布时间：2020-12-12 06:22
研究背景急性移植排斥是导致移植器官或组织功能丧失及衰竭的主要原因之一。急性排斥反应主要是以T细胞介导的细胞免疫为主。作为对外周T细胞分化发育以及功能都很重要的Notch信号途径,具有潜在的调节急性移植排斥反应的可能。但是其再同种异基因免疫应答中的作用,目前还不甚清楚。方法及结果:通过应用同种异基因移植模型,即皮片移植和异位颈部心脏移植,以及T细胞中特异性RBP-J缺失小鼠,本实验研究了Notch/ RBP-J通路在体内同种异基因应答中的作用。同野生型C57BL/6小鼠相比,T细胞中特异性剔除转录因子RBP-J的转基因小鼠所表现出的急性排斥反应明显加剧,其移植物存活时间及存活率也相对降低。移植物存活的降低与RBP-J缺失的转基因小鼠受体中抗原特异性T细胞增殖的增强,以及辅助性Th1、Th2、Th17细胞数目的增多有关。此外,虽然条件性基因剔除小鼠受体中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的比率未发生明显变化,但是在体外实验中,其抑制效应性T细胞（Teff）免疫应答的作用有一定减弱。结论:这些研究结果,提示Notch/...
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：89 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
文献回顾
T细胞和移植排斥反应
Notch 信号途径
Notch 对造血干细胞发育和维持内稳态作用
Notch与T细胞发育
Notch对外周T细胞的分化和功能的影响
Notch信号与Th1细胞
Notch与Th2细胞
Notch信号和Th17细胞以及调节性T细胞
小结
实验一 在同种异体移植免疫中外周T细胞NOTCH信号分析
1 材料
1.1 实验动物
1.2 试剂
1.3 主要仪器
1.4.Real-time PCR引物
2 方法
2.1 实验分组
2.2 皮片移·植
2.3 分离受体小鼠脾脏T 淋巴细胞
2.4 Q-PCR 检测Notch 信号上下游分子
3 结果
4 讨论
实验二 RBP-J 条件性基因小鼠的培育鉴定及其外周淋巴细胞分析
A. 材料
1.1 实验动物
1.2 试剂
1.3 仪器
1.4 引物
2. 方法
2.1 培育并鉴定小鼠基因型
2.2 外周淋巴细胞分析
3. 结果
3.1 小鼠基因型鉴定结果
3.2 外周淋巴细胞分析
4. 讨论
实验三 受体条件性阻断T 细胞NOTCH 信号对移植物及T 淋巴细·胞
1. 材料
1.1 实验动物
1.2 试剂
1.3 仪器
2. 方法
2.1 实验分组
2.2 皮片移植
2.3 心脏移植
2.4 受体外周T 淋巴细胞亚群增殖的检测
2.5 外周血液中Th 细胞亚群动态监测
2.6 脾脏及淋巴T 细胞分析
2.7 胞内细胞因子染色
2.8 HE 染色
3. 结果
3.1 存活时间
3.2 移植物病理切片HE 染色
3.3 脾脏和引流淋巴结细胞分析
3.4 BrdU检测细胞增殖情况
3.5 辅助性T 细胞（Th）检测
4. 讨论
实验四 体外混合淋巴细胞培养分析NOTCH 信号对T 细胞增殖及TREG 功能影响
1. 材料
1.1 实验动物
1.2 试剂
1.3 仪器
2. 方法
2.1 混合淋巴细胞培养（MLR）
2.1.1 stimulator 细胞制备
2.1.2 效应T 细胞获取
2.1.3 调节性T 细胞分离
2.1.4 效应性T细胞CFSE标记
2.1.5 混合淋巴细胞培养
2.2 体外增殖实验
3. 结果
3.1 Tregs 的抑制功能实验
3.2 Teff 的增殖实验
4. 讨论
小结
展望
参考文献
附录
个人简历和研究成果
致谢
本文编号：2912021
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：89 页
【学位级别】：博士
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缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
文献回顾
T细胞和移植排斥反应
Notch 信号途径
Notch 对造血干细胞发育和维持内稳态作用
Notch与T细胞发育
Notch对外周T细胞的分化和功能的影响
Notch信号与Th1细胞
Notch与Th2细胞
Notch信号和Th17细胞以及调节性T细胞
小结
实验一 在同种异体移植免疫中外周T细胞NOTCH信号分析
1 材料
1.1 实验动物
1.2 试剂
1.3 主要仪器
1.4.Real-time PCR引物
2 方法
2.1 实验分组
2.2 皮片移·植
2.3 分离受体小鼠脾脏T 淋巴细胞
2.4 Q-PCR 检测Notch 信号上下游分子
3 结果
4 讨论
实验二 RBP-J 条件性基因小鼠的培育鉴定及其外周淋巴细胞分析
A. 材料
1.1 实验动物
1.2 试剂
1.3 仪器
1.4 引物
2. 方法
2.1 培育并鉴定小鼠基因型
2.2 外周淋巴细胞分析
3. 结果
3.1 小鼠基因型鉴定结果
3.2 外周淋巴细胞分析
4. 讨论
实验三 受体条件性阻断T 细胞NOTCH 信号对移植物及T 淋巴细·胞
1. 材料
1.1 实验动物
1.2 试剂
1.3 仪器
2. 方法
2.1 实验分组
2.2 皮片移植
2.3 心脏移植
2.4 受体外周T 淋巴细胞亚群增殖的检测
2.5 外周血液中Th 细胞亚群动态监测
2.6 脾脏及淋巴T 细胞分析
2.7 胞内细胞因子染色
2.8 HE 染色
3. 结果
3.1 存活时间
3.2 移植物病理切片HE 染色
3.3 脾脏和引流淋巴结细胞分析
3.4 BrdU检测细胞增殖情况
3.5 辅助性T 细胞（Th）检测
4. 讨论
实验四 体外混合淋巴细胞培养分析NOTCH 信号对T 细胞增殖及TREG 功能影响
1. 材料
1.1 实验动物
1.2 试剂
1.3 仪器
2. 方法
2.1 混合淋巴细胞培养（MLR）
2.1.1 stimulator 细胞制备
2.1.2 效应T 细胞获取
2.1.3 调节性T 细胞分离
2.1.4 效应性T细胞CFSE标记
2.1.5 混合淋巴细胞培养
2.2 体外增殖实验
3. 结果
3.1 Tregs 的抑制功能实验
3.2 Teff 的增殖实验
4. 讨论
小结
展望
参考文献
附录
个人简历和研究成果
致谢
本文编号：2912021
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