铁代谢相关蛋白基因与淡色库蚊抗药性机制形成关系的研究

发布时间：2020-12-17 12:53

　　目的杀虫剂的大量、连续使用导致了蚊虫抗药性的发生和发展,研究蚊虫抗药性产生的机制并进行适宜治理乃当务之急。随着现代生物技术的不断发展,针对不同的物种,越来越多的抗药性基因被陆续发现。库蚊是淋巴丝虫病和脑炎的传播媒介,其抗药性的产生成为媒介病防治的一大难题。淡色库蚊主要分布在我国北方地区,本课题针对淡色库蚊对氯氰菊酯产生抗性的机制与铁代谢相关蛋白基因（铁蛋白和铁调节蛋白）是否存在一定关系进行实验研究,这对深入研究蚊虫抗药性机制具有重要的理论意义。方法设计引物,扩增目的基因全长、纯化测序、序列分析,荧光定量PCR检测铁蛋白基因和铁调节蛋白基因的表达水平。采用假设检验中的t检验方法,对两种不同处理的淡色库蚊样本体内铁蛋白和铁调节蛋白基因表达量进行统计分析。分别扩增淡色库蚊不同发育阶段的基因片段,观察随系统发育铁蛋白和铁调节蛋白基因表达是否发生变化。CCK-8检测C6/36细胞活力,构建载体重组质粒,转染C6/36细胞,测定转染重组质粒和空载质粒细胞活力,观察载入目的基因的C6/36细胞活力变化。结果通过以上实验设计,我们成功扩增了淡色库蚊铁蛋白和铁调节蛋白基因片段,经荧光定量PCR测定,淡色... 

【文章来源】：济南大学山东省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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９６１?ａａｇｃｇｔａａｔｃ?ｔｔａｔｇｔａａｇａ?ｔａａｔｔｃａｇｔａ?ｃａｃａｃａｇｔｃａ?ａｔａａａａｔｇｔｔ?ｔｇａｔｔａｇｇａ??／＿／??图２．１致倦库蚊铁蛋白基因蛋白编码序列（ＣＤＳ）??Ｄｉｓｔｒｆｃｕｔｊｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｏｐ?４６?Ｂｌａｓｔ?Ｈｉｔｓ?ｏｎ?２９?ｓｉｌｊｊｅｃｔ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｂ－??Ｍｏｕｓｅ?ｏｖｅｒ?ｔｏ?ｓｅｅ?ｔｈｅ?ｔｉｔｌｅ?ｃｌｉｃｋ?ｔｏ?ｓｈｏｗ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ??Ｃｏｌｏｒ?ｋｅｙ?ｆｏｒ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔ?ｓｃｏｒｅｓ??■?＜４０?＿?４０－５０?■?５０－８０?■?８０－２００?Ｂ?＞＝２００??１?２００?４００?６００?８００?１０００??图２．２?ＸＭ?００１８４５６４８．１序列比对结果???表２．１铁蛋白引物???Ｆｒｅｅｉｔｉｎ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?（５’－３’）?Ｌｅｎｇｔｈ?ＧＣ％?Ｔｍ??Ｆｏｒｗａｒｄ?ｐｒｉｍｅｒ?ＣＧＣＣＧＴＣＣＴＧＴＣＣＴＴＣＴＡ?１８?５６．５?６１．１??Ｒｅｖｅｒｓｅ?ｐｒｉｍｅｒ?ＴＣＣＣＴＴＧＴＧＣＴＧＣＴＣＧＴＣ?１８?５７．１?６１，１??Ｐｒｏｄｕｃｔ?ｌｅｎｇｔｈ?４９６??②铁调节蛋白引物设计选择的核酸序列为同源性较高的致倦库蚊的一段保??守区域，根据ＧｅｎＢａｎｋ序列号为ＡＹ４４５０７８．１的埃及伊蚊的铁调节蛋白核酸序列??９??

喙氐鞍谆?蛴氲??馕每挂┬曰?菩纬晒叵档难绣常崳?设计引物，同源性比对选择高度保守区域，同源性比对结果如图２．３。利用Ｐｒｉｍｅｒ??Ｐｒｅｍｉｅｒ＾设计引物，如表２．２。该基因同源性比对的高度保守核酸序列如下：??４２?１?ＡＴＣＧＣＡＴＣＣＴ?ＴＴＧＡＧＧＡＧＴＴ?ＣＡＡＧＧＡＡＣＴＣ??ＣＣＣＴＡＣＡＧＣＡ?ＴＣＣＧＴＧＴＴＣＴ?ＧＣＴＡＧＡＡＴＣＣ??４８?１?ＧＣＣＧＴＣＣＧＴＡ?ＡＣＴＧＣＧＡＣＡＡ?ＣＴＴＣＣＡＧＧＴＣ??ＣＴＣＧＡＧＡＡＧＧ?ＡＴＧＴＣＣＧＴＧＧ?ＣＡＴＣＴＴＧＡＧＣ??５４?１?ＴＧＧＡＡＧＧＣＧＡ?ＣＣＡＡＧＡＧＴＧＴ?ＣＡＡＡＡＣＣＧＡＣ??ＡＣＣＧＡＧＣＴＧＧ?ＡＧＡＴＣＣＣＧＴＴ?ＣＡＡＡＣＣＧＧＣＧ??６０?１?ＣＧＴＧＴＣＡＴＣＣ?ＴＧＣＡ


本文编号：2922077