干预肝细胞氧化应激感受器Keap1对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2表达及其活性调节的影响

发布时间：2020-12-23 04:36

　　目的:建立稳定敲低肝细胞内氧化应激感受器Kelch样ECH相关蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein1, Keap1）的模型,探讨稳定下调Keap1的缺氧肝细胞对小鼠肝星状细胞（HSCs）基质金属蛋白酶-2（MMP-2）活性及其调控分子基质金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）、MMP-14、小窝蛋白-1（Cav-1）的影响。方法:根据本组建立的方法,构建Keap1下调的稳转肝细胞株,缺氧条件下培养Keap1下调的肝细胞,通过蛋白质印迹法和QPCR验证肝细胞中Keap1mRNA是否下调以及其下游分子和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平。利用上述肝细胞培养上清液干预小鼠肝星状细胞株（HSC-T6）,分别收集小鼠HSC-T6细胞培养上清液和细胞,通过蛋白质印迹法检测小鼠HSC-T6细胞的Keap1、抗氧化应激分子核因子E2相关因子2（Nrf2）、MMP-2等蛋白表达,明胶酶谱法检测小鼠HSC-T6细胞培养液上清中MMP-2活性。结果:稳定敲低肝细胞内氧化应激感受器Keap 1后,Nrf2表达增高,肿瘤坏死因-α（TNF-α）表达减少。与对照组相比,敲... 

【文章来源】：东南大学学报(医学版). 2019年06期

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

Keap1稳定下调的肝细胞图

以Keap1shRNA稳转的AML12细胞培养上清液作为条件培养基培养HSC- T6,明胶酶谱法测定MMP- 2的活性,结果显示Keap1shRNA组较其他组MMP- 2活性增强。见图6。图3 Keap1shRNA稳转的AML12细胞在常氧和缺氧24 h Keap1的Keep1 mRNAs的表达

图2 Keap1shRNA稳转的AML12细胞在常氧以及缺氧的情况下Keap1及Nrf2蛋白的表达2.7 TNF- α抑制剂处理后的AML12细胞上清对HSC- T6细胞TNF- α表达的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]Liver fibrosis and hepatic stellate cells: Etiology, pathological hallmarks and therapeutic targets[J]. Chong-Yang Zhang,Wei-Gang Yuan,Pei He,Jia-Hui Lei,Chun-Xu Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2016(48)



本文编号：2933083