非受体酪氨酸激酶c-Abl抑制剂诱导线粒体损伤并抑制线粒体自噬

发布时间：2020-12-24 10:09

　　c-Abl （cellular Abelson gene product, c-Abl）是非受体酪氨酸激酶超家族Abelson的成员,在细胞生长和生存的许多重要信号通路,如细胞骨架重塑、细胞迁移和粘附、受体内吞作用、自噬、DNA损伤反应和细胞凋亡、促进自噬体进入溶酶体以及溶酶体组件的正常工作等方面都有重要作用。受到氧化压力刺激,c-Abl进入线粒体可以介导线粒体功能损伤和细胞死亡。正常情况下,细胞内c-Abl活性比较低,电离辐射或氧化应激时被激活。由于染色体易位形成BCR-Abl融合基因,其编码的BCR-ABL融合蛋白呈组成性激活状态,是导致慢性粒细胞性白血病（CML）的主要原因。c-Abl的抑制剂STI571（又称伊马替尼,格列卫）是90年代开发的酪氨酸激酶抑制剂类药物,是全世界第一个靶向小分子药物,在BCR-Abl阳性急、慢性白血病的治疗中发挥了重要作用。持续使用该药的病人,其预期寿命已与正常人群没有显著区别。有文献中已经报道STI571可以升高细胞的活性氧水平,同时将表皮生长因子抑制剂联合STI571用药可协同促进非小细胞肺癌细胞凋亡。线粒体是真核细胞氧化产能的重要场所,它通过内... 

【文章来源】：安徽大学安徽省 211工程院校

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
    1.1 c-Abl和c-Abl抑制剂
    1.2 线粒体和活性氧族
    1.3 线粒体自噬（mitophagy）
    1.4 AIF
    1.5 本课题拟解决的科学问题
第二章 材料与方法
    2.1 分子克隆
        2.1.1 试剂
        2.1.2 培养基
        2.1.3 定点突变质粒构建、EGFP荧光质粒构建
    2.2 细胞实验
        2.2.1 试剂及配方
        2.2.2 细胞培养与传代
        2.2.3 免疫印记（内源性磷酸化/外源性磷酸化）
        2.2.4 质谱鉴定磷酸化位点
        2.2.5 免疫荧光检测线粒体损伤和AIF在线粒体上的定位
        2.2.6 流式细胞术检测ROS
        2.2.7 AIF敲低细胞系的建立
第三章 结果
    3.1 AIF酪氨酸磷酸化修饰位点鉴定
        3.1.1 质谱检测AIF酪氨酸磷酸化修饰位点
        3.1.2 免疫印记验证AIF的酪氨酸磷酸化修饰位点
    3.2 AIF敲低的A549细胞系线粒体呈现片段化损伤
        3.2.1 AIF敲低细胞系的构建结果
        3.2.2 AIF RNAi对A549细胞线粒体形态的影响
    3.3 c-Abl抑制剂可能通过AIF介导的线粒体的损伤
        3.3.1 c-Abl抑制剂对线粒体的损伤有时间和剂量依赖性,线粒体内膜蛋白AIF与线粒体共定位异常
        3.3.2 线粒体锚定型AIF缓解c-Abl抑制剂对线粒体的损伤
    3.4 AIF敲低对c-Abl抑制剂诱导A549细胞ROS水平升高的影响
    3.5 c-Abl特异性抑制剂尼洛替尼可以诱导线粒体自噬并且抑制自噬体的清除
    3.6 讨论
        3.6.1 c-Abl抑制剂STI571通过改变AIF的定位、升高ROS水平介导线粒体损伤
        3.6.2 c-Abl抑制剂诱导线粒体自噬,抑制自噬流
参考文献
致谢



本文编号：2935464