结构蛋白prM/E对乙脑病毒神经毒力和神经侵袭力的影响

发布时间：2021-01-01 02:51

　　目的:构建乙脑病毒野毒株（SA14）及疫苗株/野毒株嵌合病毒株（SA14-14-2/SA14）感染性克隆,拯救病毒,比较重组乙脑野毒株和嵌合病毒株对小鼠的神经毒力及神经侵袭力,判断prM/E在乙脑病毒毒力中的作用。方法:采用分子克隆技术分别构建乙脑病毒野毒株（SA14）、嵌合病毒株（SA14-14-2/SA14）感染性克隆（全长cDNA质粒）,并以此为模板,体外转录得到RNA,将RNA电转染导入BHK21细胞进行病毒拯救,用噬斑形成实验、间接免疫荧光技术及测序鉴定拯救病毒,比较重组乙脑野毒株及嵌合病毒株生长特点,并用重组乙脑野毒株和嵌合病毒株分别脑内和皮下接种昆明小鼠,比较重组乙脑野毒株和嵌合病毒株对小鼠神经毒力及神经侵袭力。结果:酶切鉴定表明感染性克隆构建成功,用间接免疫荧光技术检测到拯救病毒包膜蛋白表达,噬斑形成实验发现:野毒株噬斑直径最大,其次是嵌合病毒株,疫苗株噬斑直径最小。测序结果表明:拯救病毒与理论相符合。生长曲线表明嵌合株病毒在48h达到高峰后迅速下降,而疫苗株病毒和野毒株病毒均在60h达到高峰,整个观察期,野毒株病毒的滴度高于嵌合病毒和疫苗株病毒滴度。神经毒力研究发现:... 

【文章来源】：川北医学院四川省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

嵌合病毒JEVSA14-14-2/SA14感染性克隆构建示意图

图 2 乙脑病毒株 rJEV SA14 感染性克隆构建示意图Fig2. Schematic diagram of the construction of infectious clone of rJEV SA14

图 3 pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5')酶切鉴定alysis of the plasmid pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5') with restriction enzymeA 分子量标准（ DL2000 ）； 1 ： pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5') ； 2 ： pA

【参考文献】：
期刊论文
[1]接种乙脑减毒活疫苗引起小脑共济失调一例报告[J]. 周方,俞华,赵德峰.  公共卫生与预防医学. 2014(04)
[2]乙型脑炎疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸回复突变对其毒力的影响[J]. 杨健,李玉华,李竹石,林华,汪伟,刘丽娜,倪谦枝,曾献武,杨会强.  川北医学院学报. 2013(04)
[3]乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究[J]. 黄庆生,马文煜,姜绍谆,樊英茹,张富泉,肖毅,丁天兵.  中国病毒学. 2000(04)

博士论文
[1]乙脑减毒活疫苗关键功能位点分析及相关病毒载体应用研究[D]. 叶青.中国人民解放军军事医学科学院 2015
[2]以乙脑病毒SA14-14-2为载体构建乙脑/登革2型嵌合病毒的研究[D]. 韦艳.中国疾病预防控制中心 2009
[3]乙脑病毒的分离鉴定和全长基因克隆的研究[D]. 汤德元.四川农业大学 2004



本文编号：2950811