白介素-2（IL-2）对布鲁氏菌侵染腹腔巨噬细胞（MΦ）的调节作用
发布时间：2021-01-04 02:41
目的:分别用GFP/RFP的整合布鲁氏杆菌M5/16M（以下简称GFP-M5和RFP-16M）侵染腹腔巨噬细胞（MΦ）,检测白介素-2（IL-2）调节作用下,被GFP-M5和RFP-16M侵染的MΦ培养不同时间所释放的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素（IFN-γ）、NO因子的含量;CFU测定MΦ内GFP-M5和RFP-16M的活菌数,并计算MΦ的吞噬指数,判断MΦ的吞噬及其杀菌能力;利用血球计数板和倒置荧光显微镜,计算荧光细胞数,以此来计算MΦ的吞噬率;台盼蓝染色检测不同浓度和时间点被侵染后MΦ的存活率;观察在不同时间点和不同浓度IL-2作用下,被侵染后MΦ的增殖变化;利用RT-PCR和凝胶电泳技术验证MΦ不表达并分泌IL-2;以此来探讨IL-2对MΦ在被GFP-M5和RFP-16M侵染后的免疫调节的作用,为临床运用IL-2及治疗布病提供新的思路和理论依据。方法:1、将正常的布鲁氏菌16M株与RFP-16M培养至对数期后收集菌体,用麦氏比浊管配置好所需菌液的浓度,依照细菌和细胞的比例为100:1进行侵染,利用平板计数法来比较正常细菌16M与RFP-16M在胞内的存活能力;2、...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RNA凝胶电泳注：1、1%agarose，180V，15min.
① ②图 2-1 RNA 凝胶电泳注：1、1% agarose，180V，15min.2、①②为小鼠被菌株刺激后的 Raw264.7 的总 RNA 提取和 PCRA 为模板，得到的 PCR 产物，通过 1%琼脂糖凝胶电泳检测（图 2-2tin）组有明亮的条带，空白对照组（Nc）和 IL-2 组无条带，表明了 MIL-2，本实验研究结果由外源 IL-2 引起。① ② ③ ④
C ×200 Raw264.7 D ×200 GFP-M5 infected Raw264图 2-3 倒置荧光显微镜下观察红色荧光和绿色荧光：A、B 组--A 图为 100 倍自然光源下，B 图为倒置荧光显微镜下所拍；C、D 组--C 图为 200 倍自然光源下，D 图为倒置荧光显微镜下所拍。 AB、CD 显示，与自然光照下对比，倒置荧光显微镜下观察发现，红色荧光蛋白在 M 内可以正常表达，为后续实验数据（M 的吞噬率）础。IL-2 对 GFP-M5 侵染 M 的调节作用1 GFP-M5 侵染 M 后细胞释放各细胞因子的时效关系了排除培养液（主要是血清中）中的干扰，故设一阴性对照组，表 2-2性对照所得数据：布鲁氏菌 GFP-M5 侵染 M 后，释放了 TNF- 、I，GFP-M5 刺激后 2h，TNF- 升高，6h 达到峰值[(12.360±1.202)ng/L]，与0h 比较，呈极显著差异性，P<0.01；GFP-M5 侵染 24h 时，IFN-γ 24±0.621)ng/L，P<0.01]；在 GFP-M5 侵染 2h 时，NO 因子含量持续升高，
【参考文献】：
期刊论文
[1]两种方法提取布鲁氏菌脂多糖的比较[J]. 韩秀瑞,田国忠,姜海,赵鸿雁,赵忠智,朴东日,杨镒如,崔步云. 中国媒介生物学及控制杂志. 2017(05)
[2]中药联合高效抗逆转录病毒疗法对艾滋病免疫重建不全患者IL-2及IL-10mRNA水平的影响[J]. 邹雯,王健,刘颖,咸庆飞,张复春. 中国中医基础医学杂志. 2017(06)
[3]高温高湿环境对自发性高血压大鼠IL-2、IL-12及淋巴细胞增殖的影响[J]. 薛姝婧,刘法东,聂黎虹,侯玲,周旭,牛建国,李光华. 宁夏医科大学学报. 2017(04)
[4]基于季节性动力学模型预测与控制新疆布鲁氏菌病的流行[J]. 娄鹏威,王娜,罗冬梅,张学良,徐加波,王凯. 公共卫生与预防医学. 2017(01)
[5]布鲁氏菌荧光定量PCR检测分析[J]. 李向阳,霍晓伟,武迎红,宋丽华,白旭华,张嘉保. 基因组学与应用生物学. 2016(10)
[6]新形势下布鲁氏菌病的预防和控制[J]. 吕迎辉. 中国卫生产业. 2015(35)
[7]巨噬细胞极化的研究进展[J]. 宛硕,黄艳,陈庭金,徐劲,余新炳. 中国病原生物学杂志. 2015(11)
[8]贵州省2013年人间布鲁氏菌病病原体种/型鉴定与分析[J]. 刘英,王月,马青,李世军,黄艳,周敬祝,余春,田克诚,唐光鹏,王定明. 中国人兽共患病学报. 2015(01)
[9]布鲁氏菌TIR结构域蛋白TcpB的研究进展[J]. 雷霜霜,钟志军,彭广能. 中国人兽共患病学报. 2014(11)
[10]宫颈癌组织白介素10和干扰素γ基因表达及其启动子区甲基化状态研究[J]. 马冬,杨艳艳,赵力,金玉兰,王洋,李鸥. 中国全科医学. 2014(23)
博士论文
[1]补体应答基因RGC-32对巨噬细胞分泌炎症因子的调控研究[D]. 赵鹏.山东大学 2015
[2]巨噬细胞中表皮生长因子受体激活对细胞因子及实验性结肠炎的调节作用[D]. 陆宁.天津医科大学 2014
硕士论文
[1]布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用[D]. 崔玉花.重庆理工大学 2016
[2]布鲁氏菌病动力学建模与理论分析[D]. 李明涛.中北大学 2014
[3]布鲁氏菌病血清学检测方法比较和云南陆良奶山羊布鲁氏菌病流行病学调查[D]. 束鸿鹏.南京农业大学 2014
[4]我国布鲁氏菌病时空分布及风险预测研究[D]. 黎银军.中国人民解放军军事医学科学院 2013
[5]应用B.melitensis 16M单克隆抗体建立布鲁氏菌UPT诊断试纸条检测体系[D]. 于爽.西南大学 2011
[6]重组白细胞介素-2（IL-2）对固始鸡免疫机能和分泌型免疫球蛋白（SIgA）表达影响的研究[D]. 赵峰.河南农业大学 2008
[7]布鲁氏菌脉冲场凝胶电泳分型研究[D]. 崔步云.山西医科大学 2006
本文编号：2955983
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RNA凝胶电泳注：1、1%agarose，180V，15min.
① ②图 2-1 RNA 凝胶电泳注：1、1% agarose，180V，15min.2、①②为小鼠被菌株刺激后的 Raw264.7 的总 RNA 提取和 PCRA 为模板，得到的 PCR 产物，通过 1%琼脂糖凝胶电泳检测（图 2-2tin）组有明亮的条带，空白对照组（Nc）和 IL-2 组无条带，表明了 MIL-2，本实验研究结果由外源 IL-2 引起。① ② ③ ④
C ×200 Raw264.7 D ×200 GFP-M5 infected Raw264图 2-3 倒置荧光显微镜下观察红色荧光和绿色荧光：A、B 组--A 图为 100 倍自然光源下，B 图为倒置荧光显微镜下所拍；C、D 组--C 图为 200 倍自然光源下，D 图为倒置荧光显微镜下所拍。 AB、CD 显示，与自然光照下对比，倒置荧光显微镜下观察发现，红色荧光蛋白在 M 内可以正常表达，为后续实验数据（M 的吞噬率）础。IL-2 对 GFP-M5 侵染 M 的调节作用1 GFP-M5 侵染 M 后细胞释放各细胞因子的时效关系了排除培养液（主要是血清中）中的干扰，故设一阴性对照组，表 2-2性对照所得数据：布鲁氏菌 GFP-M5 侵染 M 后，释放了 TNF- 、I，GFP-M5 刺激后 2h，TNF- 升高，6h 达到峰值[(12.360±1.202)ng/L]，与0h 比较，呈极显著差异性，P<0.01；GFP-M5 侵染 24h 时，IFN-γ 24±0.621)ng/L，P<0.01]；在 GFP-M5 侵染 2h 时，NO 因子含量持续升高，
【参考文献】：
期刊论文
[1]两种方法提取布鲁氏菌脂多糖的比较[J]. 韩秀瑞,田国忠,姜海,赵鸿雁,赵忠智,朴东日,杨镒如,崔步云. 中国媒介生物学及控制杂志. 2017(05)
[2]中药联合高效抗逆转录病毒疗法对艾滋病免疫重建不全患者IL-2及IL-10mRNA水平的影响[J]. 邹雯,王健,刘颖,咸庆飞,张复春. 中国中医基础医学杂志. 2017(06)
[3]高温高湿环境对自发性高血压大鼠IL-2、IL-12及淋巴细胞增殖的影响[J]. 薛姝婧,刘法东,聂黎虹,侯玲,周旭,牛建国,李光华. 宁夏医科大学学报. 2017(04)
[4]基于季节性动力学模型预测与控制新疆布鲁氏菌病的流行[J]. 娄鹏威,王娜,罗冬梅,张学良,徐加波,王凯. 公共卫生与预防医学. 2017(01)
[5]布鲁氏菌荧光定量PCR检测分析[J]. 李向阳,霍晓伟,武迎红,宋丽华,白旭华,张嘉保. 基因组学与应用生物学. 2016(10)
[6]新形势下布鲁氏菌病的预防和控制[J]. 吕迎辉. 中国卫生产业. 2015(35)
[7]巨噬细胞极化的研究进展[J]. 宛硕,黄艳,陈庭金,徐劲,余新炳. 中国病原生物学杂志. 2015(11)
[8]贵州省2013年人间布鲁氏菌病病原体种/型鉴定与分析[J]. 刘英,王月,马青,李世军,黄艳,周敬祝,余春,田克诚,唐光鹏,王定明. 中国人兽共患病学报. 2015(01)
[9]布鲁氏菌TIR结构域蛋白TcpB的研究进展[J]. 雷霜霜,钟志军,彭广能. 中国人兽共患病学报. 2014(11)
[10]宫颈癌组织白介素10和干扰素γ基因表达及其启动子区甲基化状态研究[J]. 马冬,杨艳艳,赵力,金玉兰,王洋,李鸥. 中国全科医学. 2014(23)
博士论文
[1]补体应答基因RGC-32对巨噬细胞分泌炎症因子的调控研究[D]. 赵鹏.山东大学 2015
[2]巨噬细胞中表皮生长因子受体激活对细胞因子及实验性结肠炎的调节作用[D]. 陆宁.天津医科大学 2014
硕士论文
[1]布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用[D]. 崔玉花.重庆理工大学 2016
[2]布鲁氏菌病动力学建模与理论分析[D]. 李明涛.中北大学 2014
[3]布鲁氏菌病血清学检测方法比较和云南陆良奶山羊布鲁氏菌病流行病学调查[D]. 束鸿鹏.南京农业大学 2014
[4]我国布鲁氏菌病时空分布及风险预测研究[D]. 黎银军.中国人民解放军军事医学科学院 2013
[5]应用B.melitensis 16M单克隆抗体建立布鲁氏菌UPT诊断试纸条检测体系[D]. 于爽.西南大学 2011
[6]重组白细胞介素-2（IL-2）对固始鸡免疫机能和分泌型免疫球蛋白（SIgA）表达影响的研究[D]. 赵峰.河南农业大学 2008
[7]布鲁氏菌脉冲场凝胶电泳分型研究[D]. 崔步云.山西医科大学 2006
本文编号：2955983
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