损伤胰腺提取液在促进BMSCs分化为胰岛素分泌细胞的机制研究

发布时间：2021-01-13 01:04

　　第一部分：损伤胰腺组织提取液对大鼠BMSCs转分化为胰岛素分泌细胞的影响目的：在大鼠损伤胰腺组织提取液促进BMSCs转分化为胰岛素分泌细胞过程中,动态检测转分化的胰岛素分泌细胞胰腺发育相关基因、蛋白、以及细胞形态的变化,探讨损伤胰腺组织提取液对BMSCs转分化为胰岛素分泌细胞的效果和机制。方法：将SD大鼠胰腺切除90%,两天后处死大鼠取剩余胰腺组织匀浆,提取组织液。在大鼠BMSCs培养过程中加入损伤胰腺组织提取液,培养14天,动态检测大鼠BMSCs是否有胰腺发育相关基因和蛋白的表达,以及细胞形态学改变,对转分化的胰岛素分泌细胞检测胰岛素阳性细胞效率,葡萄糖刺激实验评价转分化的胰岛素分泌细胞分泌胰岛素的水平。结果：损伤胰腺组织提取液可以诱导大鼠BMSCs转分化为胰岛素分泌细胞,在转分化过程中依次表达与胰腺发育密切相关的基因,如PDX-1,NKX6.1,GLUT2,PC2,C肽等；也表达成熟胰腺表达的蛋白,如：C肽,Insulin,Nkx6.1等；分泌胰岛素的细胞占13.3±1.8%,胰岛素分泌水平为天然胰岛的1/20-1/50。结论：胰腺损伤后,损伤胰腺组织分泌富含胰腺修复和发育分化的相... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

DTZ染色鉴定胰岛素分泌细胞

图4.各基因熔解曲线图a.p一aetin:b.PDX一l:e.GlutZ:d.Ngn3:e.1511:f.NkX6.l:9.PCI:11.PCZ:1.Sst3.5Real一time检测胰腺发育相关基因的动态表达变化实时荧光定量PCR的结果显示，PDXI基因在诱导第7天开始表达上调，第10天下降，第14天表达显著上调，mRNA水平约为O天的7.78倍;Ngn3从诱导开始表达显著上调，到诱导第10天达到最高，接着表达开始显著下降，到14天时mRNA水平为O天的7.78倍;作为pdx一l，Ngn3的下游基因的151一1，Nkx6.1，GlutZ，与p细胞发育相关，其表达从开始诱导起开始表达上调，到14天时，mRNA水平分别为O天表达量的3.12倍，6.36倍，2.“倍;PC从诱导开始表达逐渐上调，到第10天达到高峰后表达开始下降，在第14天时几乎不再表达。PCZ从诱导开始逐渐表达，到第7天时达最高峰，接着逐渐下降，第14天时mRNA水平为天的2倍左右;SSt从诱导开始表达逐渐上调，到第7天表达达到高峰，接着表达逐渐下调，到第14天时mRNA水平表达为0天的8倍左右。(见图5)

h图5.BMSCS分化过程中胰腺发育相关基因动态表达F195.Real一timePCRanalysisofmRNAexpressionrelatedtoPanereatiedifferentiationinBMSCs.3.6免疫荧光染色结果分析为了确认受损胰腺蛋白复合物能够诱导BMSCS分化产生胰岛素分泌细胞，我们利用免疫荧光技术检测了分化14天后的细胞，结果显示经过诱导体系诱导后的细胞分别呈现PDXI(红色)，Insulin(红色)，Somatostatin(红色)和NKX6.l(绿色)阳性，证明分化细胞确实具有合成胰岛素的功能。同时检测到C一肤(红色)阳性的细胞，证明细胞所表达的胰岛素为细胞新鲜合成而非从其他途径获得。天然SD大鼠的胰岛细胞作为阳性对照，蓝色为DAPI染核(见图6)，正常组与空白组细胞未能染色。l9


本文编号：2973903