口服重组枯草杆菌芽孢呈递型流感候选疫苗基础研究
发布时间：2021-01-15 21:09
流感是由流感病毒引起的急性呼吸系统传染病,严重危害人类健康,接种疫苗可以预防和控制流感的感染和流行。目前流感疫苗的种类主要有灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗。针对流感病毒不断变异,特别是甲型流感病毒高度变异的情况,世界各国研究人员也在积极研制能够应对流感病毒变异的通用型流感疫苗。但是,在目前各种获批的和正在研制的流感疫苗中,疫苗制剂都难以在常温条件下储存和运输,需要额外添加佐剂,并以注射方式接种,这是疫苗在生产、保存、运输和使用环节经常遇到的问题,而这些问题的存在主要是由疫苗形式决定的。枯草杆菌芽孢形式的疫苗是解决上述疫苗问题的理想选择。枯草杆菌是一种益生菌,安全性高、遗传背景清楚、基因操作便捷,其芽孢耐热稳定、口服安全、本身具有佐剂活性、能诱导粘膜免疫反应。以重组枯草杆菌芽孢作为外源抗原呈递载体,发展枯草杆菌芽孢呈递型疫苗更能满足疫苗在生产和使用上的实际需要。疫苗研究的另一关键问题是抗原的选择。由于病毒的高变异性,很大程度上影响了疫苗的广泛免疫保护作用,因此选择病毒的保守序列作为疫苗抗原是近几年研究的热点。流感病毒血凝素融合序列（HA-FP）和M2蛋白胞外区（M2e）在流...
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
多表位串联序列的性状分析
2、M2e-FP1、M2e-FP2 在原核系统的表达及鉴定2.1 M2e-FP1 及 M2e-FP2 重组质粒的构建及鉴定图 1.3 多表位串联序列蛋白三维结构的预测分析M2e-FP1:M2e-FP1:H5N1 M2e: MSLLTEVETPTRNEWECRCSDSSDGGGGSH7N1 M2e: MSLLTEVETPTRTGWECNCSGSSEH5N1 FP: GLFGAIAGFIEGGWQGMVDGWYGYHHSNH7N1 FP: GLFGAIAGFIENGWEGLIDGWYGFRHQN图 1.4 两种多表位串联序列设计模式图
按时间点采集血清并利用 ELISA 检测免疫小鼠中产生的抗体 IgG、IgG1及 IgG2a滴度。结果显示（图1.7A），与 PBS 对照组相比，M2e-FP1 及 M2e-FP2 均能诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体 IgG（p<0.001），具有良好的免疫原性。为了进一步分析抗体的亚类，本研究检测了免疫小鼠血清中 IgG 抗体亚类IgG1 和 IgG2a 的滴度。结果显示（图 1.7B，图 1.7C），重组蛋白免疫小鼠后血清中 IgG1、IgG2a抗体效价与 PBS 对照组相比均有显著的升高。图1.6 融合蛋白构建示意图M2e-FP1、M2e-Fp2的SDS-PAGE及WB鉴定1: 未诱导M2e-FP1蛋白；2: 未诱导M2e-FP2蛋白；3: 诱导后M2e-FP1蛋白；4: 诱导后M2e-FP2蛋白；M: BlusPlus portein Marker
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于甲型流感病毒血凝素茎部区的流感通用疫苗的研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋. 畜牧与兽医. 2015(03)
[2]Specific siRNA Downregulated TLR9 and Altered Cytokine Expression Pattern in Macrophage after CpG DNA Stimulation[J]. Bin Qiao~1 Baohua Li~1 Xiuli Yang~1 Hongyong Zhang~1 Yiwei Chu~1 Ying Wang~1 Sidong Xiong~(1,2) ~1Department of Immunology and Key Laboratory of Molecular Medicine of the Ministry of Education,Shanghai Medical College of Fudan University,Shanghai 200032,China;. Cellular & Molecular Immunology. 2005(02)
硕士论文
[1]禽流感病毒HA2合成肽与M2e重组蛋白免疫保护作用的初步研究[D]. 何雯雯.安徽农业大学 2013
本文编号：2979520
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
多表位串联序列的性状分析
2、M2e-FP1、M2e-FP2 在原核系统的表达及鉴定2.1 M2e-FP1 及 M2e-FP2 重组质粒的构建及鉴定图 1.3 多表位串联序列蛋白三维结构的预测分析M2e-FP1:M2e-FP1:H5N1 M2e: MSLLTEVETPTRNEWECRCSDSSDGGGGSH7N1 M2e: MSLLTEVETPTRTGWECNCSGSSEH5N1 FP: GLFGAIAGFIEGGWQGMVDGWYGYHHSNH7N1 FP: GLFGAIAGFIENGWEGLIDGWYGFRHQN图 1.4 两种多表位串联序列设计模式图
按时间点采集血清并利用 ELISA 检测免疫小鼠中产生的抗体 IgG、IgG1及 IgG2a滴度。结果显示（图1.7A），与 PBS 对照组相比，M2e-FP1 及 M2e-FP2 均能诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体 IgG（p<0.001），具有良好的免疫原性。为了进一步分析抗体的亚类，本研究检测了免疫小鼠血清中 IgG 抗体亚类IgG1 和 IgG2a 的滴度。结果显示（图 1.7B，图 1.7C），重组蛋白免疫小鼠后血清中 IgG1、IgG2a抗体效价与 PBS 对照组相比均有显著的升高。图1.6 融合蛋白构建示意图M2e-FP1、M2e-Fp2的SDS-PAGE及WB鉴定1: 未诱导M2e-FP1蛋白；2: 未诱导M2e-FP2蛋白；3: 诱导后M2e-FP1蛋白；4: 诱导后M2e-FP2蛋白；M: BlusPlus portein Marker
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于甲型流感病毒血凝素茎部区的流感通用疫苗的研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋. 畜牧与兽医. 2015(03)
[2]Specific siRNA Downregulated TLR9 and Altered Cytokine Expression Pattern in Macrophage after CpG DNA Stimulation[J]. Bin Qiao~1 Baohua Li~1 Xiuli Yang~1 Hongyong Zhang~1 Yiwei Chu~1 Ying Wang~1 Sidong Xiong~(1,2) ~1Department of Immunology and Key Laboratory of Molecular Medicine of the Ministry of Education,Shanghai Medical College of Fudan University,Shanghai 200032,China;. Cellular & Molecular Immunology. 2005(02)
硕士论文
[1]禽流感病毒HA2合成肽与M2e重组蛋白免疫保护作用的初步研究[D]. 何雯雯.安徽农业大学 2013
本文编号：2979520
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