Rbm24在小鼠胚胎干细胞向骨骼肌分化中的作用研究

发布时间：2021-01-22 13:08

　　骨骼肌是人体最丰富的组织,对于生命活动,尤其是运动的维持至关重要。但成年人体内可再生的骨骼肌干细胞数量极其有限,在肌肉发生比较大的损伤或疾病时,不足以补充受损的肌肉细胞。胚胎干细胞一直是组织和器官再生领域的研究热点,在体外可分化为骨骼肌用于再生医学,但其分化的调控机制尚不明确。因此,研究胚胎干细胞骨骼肌分化的作用和机制,可为骨骼肌疾病的细胞替代疗法和药物筛选提供途径。研究发现Rbm24在骨骼肌中高表达,在小鼠胚胎干细胞分化过程中,Rbm24升高伴随着骨骼肌标记基因的上调。我们利用Cre-Loxp可诱导调控系统,在小鼠胚胎干细胞骨骼肌分化过程中诱导Rbm24过表达,探索Rbm24在骨骼肌分化过程中的作用。我们利用悬滴法形成拟胚体诱导胚胎干细胞体外分化,通过实时荧光定量RCR检测Rbm24与骨骼肌特异性标志物的表达水平。结果显示,在分化过程中诱导Rbm24过表达,与对照组相比,Pax3、Pax7和MyoG的mRNA表达量明显增加。免疫荧光染色结果显示,过表达Rbm24后,MyoG和MyHC的蛋白表达也显著上升。并且在分化第25天,观察到Rbm24过表达组出现骨骼肌样细胞持续性抽动。表明Rb... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

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图２体节形成早期（ｉ）和体节形成末期（ｉｉ）胚胎横截面示意图??Ｆｉｇ．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ?ｓｅｃｔｉｏｎｓ?ｔｌｉｒｏｕｇｈ?ｔｈｅ?ｅｍｂｒｙｏ?ａｔ?ｅａｒｌｙ?（ｉ）?ａｎｄ?ｌａｔｅ?（ｉｉ）??

使用单层分化方法，通过调节信号通路途径诱导轴旁中胚层的分化。??Ｃｈａｌ等人通过在分化的不同时间点添加不同信号通路激活剂或抑制剂诱导??胚胎干细胞向骨骼肌细胞分化。如图３，加入Ｗｎｔ途径激活剂Ｒｓｐｏ３或ＧＳＫ３ｐ??抑制剂?ＣＨＩＲＯＮ９９０２１?促进?ｍＥＳＣｓ?向?ＰＳＭ（ｐｒｏｓｏｍｉｔｉｃ?ｍｅｓｏｄｅｒｍ）分化，之后加??入生长因子ｂＦＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ促进ＰＳＭ向Ｐａｘ７＋祖细胞、肌细胞和肌管分化ｗ。??Ｒｓｐｏ３／ＣＨＩＲ?Ｒｓｐ〇３／ＣＨＩＲ?ｂＦＧＦ，?ＨＧＦ?ｂＦＧＦ，?ＨＧＦ??Ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?广一ＬＤＮ?，?＾?ＬＤＮ?广—－Ｖ．?ＩＧＦ?ＩＧＦ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ??？?ＣｔＪ??？??Ｍｏｕｓｅ?Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ?Ｍｓｇｎｌ＊?Ｐａｘ３＊?ａＰＳＭ?Ｐａｘ７＊?ＭｙｏＧ１?Ｍｙｏｃｙｔｅ??Ｓｔｅｍ?Ｃｅｌｌ?ｐＰＳＭ?Ｃｅｌｌ?Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?ＭｙＨＣ?Ｍｙｏｔｕｂｅ??Ｄａｙ?０?Ｄａｙ?４?Ｄａｙ?６?Ｄａｙ?９?Ｄａｙ?２５??图３体外使用生长因子和小分子促进ｍＥＳＣｓ骨骼肌分化的示意图??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｃｅｌｌｓ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｍＥＳＣｓ?ｕｓｉｎｇ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒｓ?ａｎｄ?ｓｍａｌｌ?ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ．??ｍＥＳＣｓ在不同条件下可分化为三胚层所有不同的细胞类型，包括骨骼肌。??然而

?第一章前言???ＲＢＮＳ（ＲＮＡ?Ｂｉｎｄ－ｎ－Ｓｅｑ）等，以?ＲＮＡ?为核心的研究技术包括?ＣｈＩＲＰ（Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ??ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｂｙ?ＲＮＡ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）和?ＣＨＡＲＴ（Ｃａｐｔｕｒｅ?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＲＮＡ??ｔａｒｇｅｔｓ）等?〇??１．３．２?ＲＮＡ结合蛋白功能的多样性??ＲＢＰｓ在ＲＮＡ生物过程的每一个方面都发挥功能，从ＲＮＡ的转录，??ｐｒｅ－ｍＲＮＡ的剪切，多腺苷酸化，到ＲＮＡ的修饰，转运，定位，转录和翻转。??ＲＢＰ不仅影响ＲＮＡ的每一个生物过程，而且为这些过程间提供了一个很好连??接的作用０＿＇２７］，这些错综复杂网络的正常运行对于转录后事件的协调是必不可??少的。??


本文编号：2993282