动力学方法探讨PaP1 DNA聚合酶Gp90跨DNA脱碱基损伤的机制
发布时间：2021-01-27 11:57
目的:研究铜绿假单胞菌噬菌体PaP1 DNA聚合酶Gp90通过脱碱基位点损伤的动力学分子机制,有助于我们理解这种损伤对DNA复制造成DNA紊乱和突变的机制,从而为人类相关疾病的治疗奠定基础;为揭示DNA跨损伤合成、DNA修复之间的关系以及环境毒物致DNA脱碱基损伤的作用机制提供科学依据。方法:构建、表达和纯化Gp90 exo-,通过全长延伸、单个碱基插入和下一位碱基延伸的动力学方法研究脱碱基位点对DNA复制效率和保真度的影响;采用前稳态前动力学方法研究DNA复制时单个碱基点插入的速度;通过表面等离子共振技术研究蛋白质与DNA间相互作用,探究脱碱基损伤对DNA聚合酶与DNA相互作用的影响。结果:（1）正常模板时,野生型Gp90能产生全长延伸产物和外切产物。当模板是脱碱基损伤的模板时,野生型Gp90只能产生降解产物,而没有延伸产物。Gp90 exo-进行DNA复制时,与正常模板相比,DNA聚合酶通过脱碱基位点时几乎没有全长延伸产物,两个脱碱基的模板只出现了一位28mer的延伸产物。（2）Gp90 exo-进行单个碱基插入的稳...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Pet28b-Gp90exo-小量诱导SDS-PAGE电泳分析结果
et 28b-Gp90 exo 大量诱导 SDS-PAGE 电 Gp90exo-were overexpressed and analyzeo 蛋白纯化结果蛋白纯化结果，M1 代表蛋白 Marke，Flow）；4-14：梯度洗脱目的蛋白样xo 的 N 端有 6 组氨酸标签，促进了好被吸附，洗脱出来的蛋白条带在预管进行浓缩，后在蛋白存储液中进行用 NanoPhotometer 测 260 nm 处的吸白浓度为第一管：230 uM、第二管：4管：250 uM、第六管：400 uM。于-
24图 4 Pet 28b-Gp90 exo 蛋白纯化结果（SDS-PAGE 电泳检测）igure 4 Pet 28b-Gp90exo- was purified and analyzed on a 10 % SDS-P
本文编号：3003007
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Pet28b-Gp90exo-小量诱导SDS-PAGE电泳分析结果
et 28b-Gp90 exo 大量诱导 SDS-PAGE 电 Gp90exo-were overexpressed and analyzeo 蛋白纯化结果蛋白纯化结果，M1 代表蛋白 Marke，Flow）；4-14：梯度洗脱目的蛋白样xo 的 N 端有 6 组氨酸标签，促进了好被吸附，洗脱出来的蛋白条带在预管进行浓缩，后在蛋白存储液中进行用 NanoPhotometer 测 260 nm 处的吸白浓度为第一管：230 uM、第二管：4管：250 uM、第六管：400 uM。于-
24图 4 Pet 28b-Gp90 exo 蛋白纯化结果（SDS-PAGE 电泳检测）igure 4 Pet 28b-Gp90exo- was purified and analyzed on a 10 % SDS-P
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