基于Ferritin蛋白的甲型流感病毒M2e抗原纳米颗粒的构建及免疫学评价

发布时间：2021-02-02 14:32

　　[目的]季节性流感的年度流行和大流感的潜在威胁给人类健康和社会稳定带来极大挑战。流感病毒具有高发的突变率和基因重配特点,使广谱流感疫苗的开发和抗病毒药物的研制受到限制,目前使用的流感裂解疫苗主要以病毒蛋白HA、NA为疫苗的主要组成抗原,但HA、NA易发生抗原漂移和转换的特性使现有的季节性流感疫苗毒株每年都需要根据WHO预测的流行株而进行更换和生产。这种毒株筛选和制备工艺的滞后性无法满足各国卫生部门对流感防控的快速反应和广谱性要求。因此筛选和开发具有流感病毒保守抗原的亚单位疫苗,通过结构生物学、纳米技术进行抗原呈递的技术平台成为了流感通用疫苗的重要研究方向。在这个领域,病毒基质蛋白M2胞外部分具有在甲型流感病毒中的良好保守性和较好抗原性,成为通用流感疫苗的候选抗原之一。同时,来源于幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）铁蛋白（Ferritin）可以自我折叠成24个亚单位组成的八面体球形纳米颗粒,融合表达特定病原体基因片段后具备良好的抗原性和免疫原性。这为本课题使用流感病毒跨膜蛋白M2胞外部分,在ferritin蛋白的引导下进行融合表达,并自组装纳米颗粒,进行实验性疫苗的探索... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１：流感结构示意图??７??

蛋白外壳是由２４个铁蛋白亚基自组装而成球形空心纳米笼状结构，??其中每３个亚基组成一个三聚体亚单位，８个三聚体再组装成一个外径１２?ｎｍ，??内径８?ｎｍ的外壳（图２）。铁核则位于纳米笼状结构之中，其主要成分为水铁??矿，主要为起抗氧化剂作用的氧化结合位点［２７］。??Ｅｘｔｅｒｉｏｒ?ｓｕｒｆａｃｅ?Ｉｎｔｅｒｉｏｒ?ｃａｖｉｔｙ??＿暴??图２：铁蛋白铁蛋白内表面和外表面剖面图??１１??

Ａ?Ｂ??图１：双酶切，并进行ＰＣＲ鉴定??２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ，?６Ｈｉｓ－Ｍ２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ，ｐｃＤＮＡＴＭ３．１（＋）载体双酶切电２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ?，?ＳＮＡＰ?表达载体双酶切电泳鉴定。Ｍ：ＤＬ?５０００?ＤＮ为?Ｍ２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ?，?６Ｈ】ｓ－?Ｍ２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ?，?ｐｃ?ＤＮＡ？３．］（＋）空载体，ＳＮＡＰ表达载体。??Ｍ２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ纳米组装颗粒表达及验证??迹??疫印迹试验方法来分析Ｍ２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ自组装纳米颗粒ｃ?ＤＮＡＴＭ３．１－Ｍ２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ，ＳＮＡＰ－?Ｍ２ｅ－ｆｅｒｒｉｔｉｎ?重组质于４８?ｈ后对细胞进行变性蛋白提取，通过变性胶用

【参考文献】：
期刊论文
[1]单细胞测序技术在结核病研究中的应用[J]. 尤信信,余卫业,谭卫国,刘新光.  新发传染病电子杂志. 2017(03)
[2]纳米颗粒疫苗[J]. Zhao L,江丽君.  微生物学免疫学进展. 2016(01)
[3]铁蛋白纳米颗粒应用于生物医疗领域的研究进展[J]. 李志鹏,刘庆友,石德顺.  生物技术通报. 2015(10)
[4]单细胞测序技术及应用进展[J]. 朱忠旭,陈新.  基因组学与应用生物学. 2015(05)
[5]单细胞测序技术及其在肿瘤研究中的应用[J]. 梁爱斌,梁智宇,汪俊帮.  内科理论与实践. 2015(01)
[6]新一代测序技术在肿瘤临床中的应用[J]. 张濛,张青云,徐国宾.  临床检验杂志. 2014(09)
[7]单细胞转录组分析研究进展[J]. 文路,汤富酬.  生命科学. 2014(03)
[8]通用型流感疫苗的研究进展[J]. 张立霞,周剑芳,舒跃龙,杨保收,何召庆.  病毒学报. 2014(01)
[9]流感病毒疫苗研究的新进展[J]. 苏晓晓,许可,金红.  日本医学介绍. 2006(09)
[10]流感疫苗的研究进展[J]. 戚凤春,盛军.  中国生物制品学杂志. 2004(03)



本文编号：3014853