抗坏血酸调控骨髓间充质干细胞衰老的作用机制研究

发布时间：2021-02-02 20:24

　　目的:通过构造骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell,BMSCs）体外衰老模型,研究抗坏血酸在延缓BMSCs衰老中的具体作用以及潜在的分子机制。方法:1.选取7日龄SD大鼠,在无菌条件下完全分离出胫骨和腓骨,并抽取其中的骨髓,再利用全骨髓贴壁培养法在体外分离培养出BMSCs。2.利用D-半乳糖与BMSCs共培养,诱导BMSCs衰老,试图建立BMSCs体外衰老模型。3.将抗坏血酸与衰老的BMSCs共培养,利用SA-β-Gal试剂盒染色检测分析抗坏血酸作用于衰老BMSCs后SA-β-Gal染色阳性率的变化,利用免疫荧光显微镜检测抗坏血酸作用于衰老BMSCs后细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）含量的变化,利用Western blot法分析衰老相关蛋白p16INK4a的变化并研究BMSCs衰老中相关信号通路蛋白的变化。4.联用AKT抑制剂与抗坏血酸进一步验证AKT/mTOR信号通路在抗坏血酸抑制细胞衰老中的作用。结果:D-半乳糖能诱导BMSCs衰老,衰老的BMSCs中ROS含量增多。抗坏血酸减少了衰老MSCs中的... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【部分图文】：

图２：?Ｐ０代细胞原始集落形成，可见梭形、多边形ＢＭＳＣ贴壁，血细胞成圓点状，??

流式细胞仪检测的数据显示了我们提取的大鼠ＢＭＳＣｓ表面标记物的表达情??况，培养的Ｐ３代骨髓间充质干细胞表面分子蛋白标记ＣＤ２９、ＣＤ９０呈高表达，而??ＣＤ３１、ＣＤ４５阴性（图１），证明所提取细胞为ＢＭＳＣ。??｜ｎ?????—ＣＤ９０?—?ＣＤ２９?—?ＣＤ３１?—?ＣＤ４５????ｃｏｎｔｒｏｌ?＾?—?ｃｏｎｔｒｏｌ?宕?＿?ｃｏｎｔｒｏｌ?＾?＿?ｃｏｎｔｒｏｌ?，??ｙｉｃ?ｊ?ｌ！??ｉ〇１?ｍ２?ｉ〇３?１０４?ｉｇ５?１０６?＼ｉｊ７２?ｉ〇１?ｉ＃２?１０３?ｕ４?，０７２?，〇１?时２?的?３?川５?１０６?ｗ７，２?ｉ〇１?ｉａ２?ｔ０３?１９４?｜９Ｓ?｜〇６?ｉ〇７Ｊ??ＦＬ２－Ａ?ＦＬ１－Ａ?ＦＬ２－Ａ?ＦＬ４－Ａ??图１：流式细胞仪：检测细胞表而分子蛋ｆｔ?ＳＣＤ２９和ＣＤ９０麗表达，??Ｗ?ＣＤ３１和ＣＤ４５表达为■性：，??５．２普通光学显微镜下观察各代骨髓间充质干细胞形态变化??分别取Ｐ０、Ｐ３、Ｐ５代在培养的间充质干细胞，在光镜下观察细胞形态改变。??发现Ｋ）代细胞原始集落形成，可见梭形、多边形ＢＭＳＣ岵蜜，血细胞成圆点状，未??贴壁，Ｐ３代细胞初步纯化，细胞呈旋涡状生长，外形似长梭形和多边形《?Ｐ５代细胞??基本完全纯化。所以我们选取Ｐ３－Ｐ５代骨髓间充质宁细胞开展我们下面的实验。??■?■?Ｉ??ｐ〇?Ｐ３?Ｐ５??图２：?Ｐ０代细胞原始集落形成

?儒交通大學＿雜賊５．３确定Ｄ－半乳糖作用浓度??分另＿甩ｌｇ／１，ｌ〇ｇ／ｌ，ｌ〇〇ｇ／ｌ的Ｄ－半乳糖与骨髓间２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ，再利用ＣＣＫ－８细胞增殖活性检测试作用不同时间对间充质干细胞衰老的影响。我们发现活性的影响呈时间和浓度依赖性。通过ＩＣ５０和Ｄ－半１０ｇ／ｌＤ－半乳糖作用４８ｈ用于我们接下面的实验。该作究者应用Ｄ－半乳糖诱导细胞衰老相符？??

【参考文献】：
期刊论文
[1]D-半乳糖对大鼠骨髓间充质干细胞衰老的影响[J]. 颜冰希,余姗姗,冯晓,吴冬玲,蔡昕筱,周倩沁,何晓敏,陈爱嫩,张大勇.  浙江大学学报(医学版). 2013(06)
[2]D-半乳糖对大鼠骨髓间充质干细胞拟衰老作用的实验研究[J]. 邢玉芝,杨玲麟,林洪,胡火珍,王有为.  中国修复重建外科杂志. 2006(04)



本文编号：3015318