CLARITY技术构建肝脏透明化模型及技术相关应用

发布时间：2021-02-04 17:47

　　目的:探索一种基于CLARITY技术的快速肝组织透明化手段,通过条件优化对肝硬化动物模型进行免疫荧光标记三维成像,并基于该技术开发一种石蜡切片的抗体洗脱术。方法:（1）水凝胶灌注大鼠,取出肝脏待水凝胶凝固后切为1mm薄片。切片随机分为两组,对照组采用常规被动脂质清除法处理,实验组置于特制电泳装置中,在外加电场条件下洗涤脂质,通过提高电泳温度并量化组织透明度,探索最优肝透明化条件。（2）使用肝透明优化条件对DEN诱导的大鼠肝硬化模型进行脂质清除,利用多种大鼠器官组织探索免疫荧光标记成像条件,对大鼠肝硬化模型组织实施激光共聚焦显微镜扫描三维成像。（3）将CLARITY技术的水凝胶固定、脂质清除和抗体洗脱特性应用于石蜡切片,探索石蜡切片的透明化方法的最佳条件,进行抗体洗脱,并与常规酸洗脱进行对比。通过对比免疫荧光标记切片洗脱前后荧光信号变化及积分荧光强度测定来确定抗体洗脱效果。结果:（1）实验组在12V电压下37℃电泳48h时肝切片相对透明度达到最高并保持至96h,随后相对透明度开始下降,而在48h电泳清除脂质后提高温度继续电泳48h,肝组织切片相对透明度可进一步提高且对照组脂质清除速度明显... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大鼠器官被动脂质清除后光学透明度变化

ETC设备原理图

肝切片常规ETC与被动清除48h灰度值对比

【参考文献】：
期刊论文
[1]CLARITY技术及其在生物学研究中的应用进展[J]. 邬国斌,何剑波,连芳.  中国癌症防治杂志. 2015(02)
[2]免疫酶双重染色中抗体洗脱的进一步研究[J]. 宋天保,王丽蓉.  中国组织化学与细胞化学杂志. 1992(02)



本文编号：3018700