流体剪应力联合生长因子/基底硬度对骨髓间充质干细胞定向分化的影响

发布时间：2021-02-08 06:23

　　骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）具有多向的分化潜能,可分化为成骨细胞、软骨细胞以及脂肪细胞等。研究表明,力学刺激、生长因子以及细胞生长的基底硬度都可在一定程度上调控BMSCs的分化。生理条件下,BMSCs在受到力学刺激的同时还受到生长环境的基底硬度以及多种生长因子的调控。因此,本研究采用力学加载联合生长因子/基底硬度同时作用于BMSCs,通过检测细胞的成骨向分化标志物碱性磷酸酶（ALP）和软骨向分化标志物糖胺聚糖（GAG）的表达量,来考察力学刺激、生长因子以及细胞生长的基底硬度三种条件对BMSCs定向分化的影响。主要研究方法、内容和结果如下:（1）探讨流体剪应力联合基底硬度对BMSCs分化的影响:实验用细胞为第二、三代骨髓间充质干细胞,实验组分为“24 h”组和“48 h”组,“24（48）h组”表示接种于硬度为34 KPa和80 KPa（分别模拟软骨和骨的硬度）的水凝胶上培养24（48）h后采用两种不同线性增加速度的流体剪应力（△SS）作用20 min的BMSCs。两种△SS分别表示从静置后的0 min开始,在0 m... 

【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BMSCs诱导后经两种不同线性增加的流体剪应力加载方式示意图

图 2.2 平板流动腔系统示意图Fig. 2.2 Schematic of a parallel-plate flow chamber system：流动小室（L=7.5cm，W=2.5cm，H=0.2mm）；B：硅胶垫片（h=1.2mm）；C1，C2，机玻璃；D：灌流液入口；E：灌流液缓冲分散区；F：灌流液下行分散区；G：灌流液出1.储液瓶；2.蠕动泵；3.平板流动腔。2.3.7 碱性磷酸酶（ALP）活性的测定定原理：碱性磷酸酶能使磷酸苯二钠分解，产生游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与基安替吡啉反应经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物，可以根据红色物质的行酶活力高低的测定。再根据培养细胞中碱性磷酸酶活力计算公式得出样 ALP 活性。品的采集与处理：取出静置培养 48 h 培养的细胞，用 4 ℃预冷的 PBS 轻柔的对载玻片清洗两后将载玻片置于冰上，取 300 μL 细胞裂解液（1% 曲拉通 X-100）加入到

与蛋白浓度呈正比，据此我们可以测定溶液或者线绘制：A 试剂盒里面的蛋白标准品用 PBS 稀释至浓度为 0.4、0.5 mg/mL 各浓度的蛋白检测标准品，并使照；品数量，按 BCA 试剂 A：BCA 试剂 B=50:1 的比例分混匀，混匀的 BCA 工作液在 24 h 内稳定；μL 的配置好的不同浓度的蛋白标准品加入到 96 孔的 BCA 工作液混匀，在于 37 ℃放置 20-30 min 后白标准品的 570 nm 处吸光值；的数据使用 GraphPad Prism 6 进行数据分析，并绘计算出回归线方程为 Y=0.6019*X+0.00126 (R2=0 为样品的浓度值（μg/mL）；


本文编号：3023500