梅毒螺旋体三价粘附素菌影构建及其免疫原性研究

发布时间：2021-02-19 08:18

　　目的:构建梅毒螺旋体（Tp）三价粘附素（Tp0751-Tp0136^N-Tp0435）原核及真核重组菌影（BG）,期望能在BALB/c小鼠体内有效诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答,为发展新型梅毒疫苗奠定基础。方法:构建pET30a-E’-Tp0751-Tpr0136^N-Tp0435原核表达重组体（E’为菌影锚定蛋白/基因）,转化入大肠埃希菌（E.coli）中诱导表达融合蛋白,通过化学渗透压法制备原核重组蛋白菌影（E’-Q-BG,Q=Tp0751-Tpr0136^N-Tp0435蛋白）,检测菌影裂解率,琼脂糖电泳法鉴定菌影,WB鉴定目的蛋白表达。构建pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435真核表达重组体,将其转载入预先用化学渗透压法制备的空菌影JM109中,制备成重组真核菌影（pcD-Q/BG,Q=Tp0751-Tpr0136^N-Tp0435编码基因）。将菌影中真核重组质粒转染至鼠源性巨噬细胞RAW264.7中,48 h后用WB鉴定目的蛋白表达。将49只雌性... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：108 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
常用英文缩写
第1章 前言
第2章 实验材料
    1. 主要实验试剂
    2. 细胞株、质粒、菌株和血清
    3. 主要实验仪器
    4. 实验动物
第3章 实验方法
N-Tp0435原核融合表达载体的构建及鉴定'>    3.1 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435原核融合表达载体的构建及鉴定
N-Tp0435原核重组融合蛋白的表达与鉴定'>    3.2 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435原核重组融合蛋白的表达与鉴定
    3.3 化学渗透压法制备菌影EBG
N-Tp0435原核重组融合蛋白菌影的制备与鉴定'>    3.4 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435原核重组融合蛋白菌影的制备与鉴定
N-Tp0435真核表达载体的构建与鉴定">    3.5 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435真核表达载体的构建与鉴定
    3.6 真核质粒的提取与装载
    3.7 鼠源性巨噬细胞RAW264.7细胞培养
N-Tp0435真核菌影重组蛋白的WesternBlot鉴定">    3.8 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435真核菌影重组蛋白的WesternBlot鉴定
    3.9 重组菌影免疫活性的检测
    3.10 统计学分析处理
第4章 实验结果
N,Tp0435的PCR扩增">    4.1 E’,Tp0751,Tp0136^N,Tp0435的PCR扩增
N-Tp0435重组载体菌液PCR的扩增'>    4.2 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435重组载体菌液PCR的扩增
N-Tp0435重组载体双酶切鉴定与序列分析'>    4.3 pET30a-E'-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435重组载体双酶切鉴定与序列分析
N-Tp0435原核基因重组蛋白的表达与鉴定">    4.4 pET30a-E’-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435原核基因重组蛋白的表达与鉴定
    4.5 化学渗透压法制备菌影的鉴定与产率
N-Tp0435重组载体的菌液PCR扩增">    4.6 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435重组载体的菌液PCR扩增
N-Tp0435重组载体的提取与装载">    4.7 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435重组载体的提取与装载
N-Tp0435真核重组蛋白表达与鉴定">    4.8 pcDNA3.1（+）-Tp0751-Tp0136^N-Tp0435真核重组蛋白表达与鉴定
    4.9 重组菌影免疫活性
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
附录一
附录二
文献综述
    参考文献
作者攻读攻读学位期间的科研成果
致谢



本文编号：3040852