基因重组血管生长抑制剂Kringle5与小分子物质相互作用研究

发布时间：2021-02-22 17:57

　　目前,利用血管生成抑制类药物来抑制血管新生已经成为治疗肿瘤等血管新生类疾病的重要思路和方向。在目前所发现的血管生成抑制类因子中,人纤溶酶原的第五个环饼区,即Kringle5,是目前发现的抑制血管内皮细胞增殖作用特异性较高,毒副作用较小,且活性较强的抑制血管新生类物质,因此,Kringle5在肿瘤等血管新生类疾病的临床治疗方面具有巨大的潜力和应用价值。本工作将光谱法、亲和色谱法等实验方法以及分子对接、热力学和动力学模拟等理论预测方法相结合,研究了变性剂诱导的基因重组血管生长抑制剂Kringle5的结构变化过程以及一些小分子配体与血管生长抑制剂Kringle5之间的相互作用,为阐明血管生长抑制剂Kringle5的作用机理以及进一步对其药理药效的调控提供了一些新的视野。1.综合利用内源荧光光谱法、荧光相图分析、荧光探针以及荧光猝灭等方法监测表征了血管生长抑制剂Kringle5在盐酸胍和脲诱导下的展开-重折叠过程中的结构变化特征。结果显示,在盐酸胍和脲诱导的Kringle5的去折叠和重折叠过程中均不存在折叠中间态,即]Kringle5的去折叠和重折叠过程均符合“二态模型”。在盐酸胍和脲诱导的去... 

【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 研究背景
    1.2 主要研究内容
        1.2.1 血管生长抑制剂Kringle 5与变性剂的相互作用研究
        1.2.2 血管生长抑制剂Kringle 5与小分子配体的相互作用研究
    1.3 主要研究方法
        1.3.1 荧光光谱分析法
        1.3.2 分子模拟对接技术
        1.3.3 亲和色谱分析法
    1.4 研究意义
第二章 变性剂诱导的血管生长抑制剂Kringle 5的去折叠和重折叠过程
    2.1 引言
    2.2 所用仪器及试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 盐酸胍诱导的Kringle 5的去折叠过程
        2.3.2 盐酸胍诱导的Kringle 5的重折叠过程
        2.3.3 脲诱导的Kringle 5的去折叠过程
        2.3.4 脲诱导的Kringle 5的重折叠过程
        2.3.5 内源荧光光谱的测定以及荧光相图
        2.3.6 ANS表征Kringle 5 的去/重折叠过程
        2.3.7 荧光猝灭法研究Kringle 5的去/重折叠过程
    2.4 实验结果与讨论
        2.4.1 盐酸胍诱导的Kringle 5去折叠过程的内源荧光谱及荧光相图分析
        2.4.2 盐酸胍诱导的Kringle 5重折叠过程的内源荧光谱及荧光相图分析
        2.4.3 脲诱导的Kringle 5去折叠过程的内源荧光谱及荧光相图分析
        2.4.4 脲诱导的Kringle 5重折叠过程的内源荧光谱及荧光相图分析
        2.4.5 ANS表征Kringle 5的去/重折叠过程
        2.4.6 荧光猝灭法研究盐酸胍诱导的Kringle 5的去/重折叠过程
        2.4.7 荧光猝灭法研究脲诱导的Kringle 5的去/重折叠过程
    2.5 本章小结
第三章 血管生长抑制剂Kringle 5与小分子配体相互作用的光谱法研究与分子对接
    3.1 Kringle 5与L-lysine的相互作用研究
        3.1.1 实验仪器及所用试剂
        3.1.2 实验方法
        3.1.3 实验结果与讨论
        3.1.4 小结
    3.2 Kringle 5与EACA的相互作用研究
        3.2.1 实验仪器及所用试剂
        3.2.2 实验方法
        3.2.3 实验结果与讨论
        3.2.4 小结
    3.3 Kringle 5与7-AHA的相互作用研究
        3.3.1 实验仪器及所用试剂
        3.3.2 实验方法
        3.3.3 实验结果与讨论
        3.3.4 小结
    3.4 Kringle 5与AMCHA的相互作用研究
        3.4.1 实验仪器及所用试剂
        3.4.2 实验方法
        3.4.3 实验结果与讨论
        3.4.4 小结
    3.5 Kringle 5与Benzylamine的相互作用研究
        3.5.1 实验仪器及所用试剂
        3.5.2 实验方法
        3.5.3 实验结果与讨论
        3.5.4 小结
    3.6 Kringle 5与五种小分子配体结合体系的比较及讨论
第四章 亲和色谱法研究Kringle 5与小分子配体的相互作用——方法的初步建立
    4.1 引言
    4.2 实验仪器及所用试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 定向固定化Kringle 5填料的制备
        4.3.2 定向固定化Kringle 5色谱柱的表征
        4.3.3 前沿色谱分析
    4.4 实验结果与讨论
        4.4.1 定向固定化Kringle 5亲和色谱柱活性表征
        4.4.2 前沿色谱分析
        4.4.3 朗格缪尔等温吸附模型
        4.4.4 结合常数的测定
    4.5 小结
全文总结
    1. 本工作的主要研究内容与研究结果
    2. 未来工作展望
参考文献
攻读学位期间取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[6]药物小分子与生物大分子相互作用的研究方法进展[J]. 卢继新,李惠芬,蔡乐,李娟,张贵珠.  分析科学学报. 2007(05)
[7]前沿色谱法对盐酸小檗碱和固定化牛血清白蛋白结合作用的研究[J]. 曾晓蕾,雷根虎,卫引茂.  色谱. 2007(03)
[8]两步柱色谱法分离纯化重组肿瘤血管生长抑制因子Kringle 5[J]. 贾信贵,边六交.  色谱. 2007(03)
[9]人纤溶酶原Kringle 1-4.5结构域的表达及活性鉴定[J]. 周庆玮,谢静莉,辛利,徐韧,叶勤,李载平,甘人宝.  生物化学与生物物理学报. 2003(02)
[10]羰基咪唑法合成牛血清白蛋白键合手性固定相[J]. 封顺,张强,邹汉法,王吉德,陈小明,张曾子.  高等学校化学学报. 2002(07)

博士论文
[1]功能蛋白与药物相互作用的亲和色谱法研究[D]. 何媛.西北大学 2012



本文编号：3046356