抗结核新型化合物的筛

发布时间：2017-04-15 09:18

  本文关键词：抗结核新型化合物的筛选、初步评价及表面展示SIV Gag抗原的重组耻垢分枝杆菌的构建，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：结核病(Tuberculosis, TB)是全球危害最大的传染病之一。耐药TB的出现及TB与艾滋病病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)共感染使人类对抗TB新药的需求更为迫切。然而传统的抗TB药物研发模式所需周期长、成本高,在长达40多年的时间里,没有抗TB新药诞生。本实验利用新型的抗TB药物筛选模型,成功的筛选到一种化合物(5k),在体内和体外的评价中都表现出良好的杀菌活性。利用该模型,可以在体内外连续检测同一样品,实验过程中不需要添加任何底物,仅需3-5天便可以对药物活性进行快速评价,灵敏度高,重复性强。在活性检测中：使用无抗性的自主发光的H37Ra (Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Ra, UAIRa)对一系列化合物进行初筛,筛选出包括5k在内的数十个具有体外杀菌活性的新型化合物；用无抗性自主发光的H37Rv (Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Rv, UAlRv)对这些化合物的杀菌活性做进一步验证,发现5k的体外杀菌效果较好；并且对于临床耐药菌株,5k也有较好的杀菌活性。在体内对于药物活性的检测中,使用不同剂量的5k对感染UAIRa的BALB/c小鼠进行治疗,发现5k在体内也表现出较强的杀菌效果,其杀菌效果与药物剂量呈正相关性,并且没有表现出体内毒性。初步的体内评价表明5k有希望成为抗TB新药。自人类首次发现艾滋病以来,科研人员一直致力于研发一种安全有效的HIV疫苗。科研人员经过30多年潜心研究,提出HIV疫苗需要诱发机体多重免疫反应。这样,疫苗诱导产生的抗体可以在病毒感染时中和部分病毒,其后以细胞免疫应答为主的免疫反应能够清除被病毒感染的细胞,从而降低HIV载量,并减少HIV的传播效率,达到预防与治疗的双重目的。近年来,由于性传播途径成为HIV传播的主要方式,所以能够诱发机体粘膜免疫反应的分枝杆菌疫苗载体在疫苗研发中越来越受到重视。将HIV-1的Env抗原展示在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, Msmeg)表面,构建HIV疫苗,检测发现,该疫苗可以诱发机体长期的粘膜免疫反应,并且抗原表达在表面的免疫效果好于抗原表达在胞内。对HⅣ患者体内的免疫应答和病毒载量进行比较,可以发现只有当针对Gag的反应更强时,病毒载量才会下降。基于以上成果,本实验选择了三种不同载体蛋白的表面展示系统,在新型的无任何毒力的Msmeg疫苗载体的表面展示SIV Gag抗原,构建重组菌株。
【关键词】：结核病 筛药模型 HIV 表面展示 疫苗
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 绪论10-20
• 1.1 结核病概述10-14
• 1.1.1 结核病10
• 1.1.2 Mtb的生物学特性10-11
• 1.1.3 Mtb的致病机制11
• 1.1.4 TB的防治11-12
• 1.1.5 耐药TB的出现12-14
• 1.1.6 抗TB新药的研发14
• 1.2 艾滋病概述14-20
• 1.2.1 艾滋病14-15
• 1.2.2 HIV的生物学特性15-16
• 1.2.3 HIV的致病机制16
• 1.2.4 HIV的治疗16
• 1.2.5 HIV疫苗的研发16-17
• 1.2.6 利用重组BCG构建HIV疫苗17-19
• 1.2.7 利用重组Msmeg构建HIV疫苗19-20
• 第二章 抗结核新型化合物的筛选、初步评价20-29
• 2.1 引言20-21
• 2.2 实验材料21-23
• 2.2.1 实验菌株与实验动物21
• 2.2.2 主要试剂和耗材21
• 2.2.3 抗生素与药物21-22
• 2.2.4 常用培养基与相关溶液22
• 2.2.5 实验仪器22-23
• 2.3 实验方法23-24
• 2.3.1 抗TB新型化合物活性的体外检测23-24
• 2.3.2 抗TB新型化合物活性的体内检测24
• 2.4 结果与讨论24-27
• 2.4.1 抗TB新型化合物体外活性的评价24-26
• 2.4.2 抗TB新型化合物体内活性的初步评价26-27
• 2.5 小结27-29
• 第三章 表面展示SIV Gag抗原的重组耻垢分枝杆菌的构建29-59
• 3.1 引言29-32
• 3.2 实验材料32-34
• 3.2.1 实验菌株与质粒32
• 3.2.2 主要试剂和耗材32-33
• 3.2.3 抗生素与药物33
• 3.2.4 常用培养基与相关溶液33-34
• 3.2.5 实验仪器34
• 3.3 实验方法34-50
• 3.3.1 携带载体蛋白基因的质粒构建34-37
• 3.3.2 载体蛋白基因与hsp60启动子连接的质粒构建37-39
• 3.3.3 携带eGFP基因的质粒构建39-41
• 3.3.4 eGFP基因与载体蛋白基因连接的质粒构建41-42
• 3.3.5 eGFP的表面展示整合型质粒构建42-44
• 3.3.6 eGFP表面展示质粒转化ZWY244
• 3.3.7 利用荧光倒置显微镜验证eGFP的表达44-45
• 3.3.8 携带抗原SIV Gag基因的质粒构建45-47
• 3.3.9 抗原SIV Gag基因与载体蛋白基因连接的质粒构建47-48
• 3.3.10 抗原SIV Gag基因的表面展示整合型质粒的构建48-50
• 3.3.11 抗原SIV Gag转化新型疫苗载体ZWY250
• 3.4 结果与讨论50-58
• 3.4.1 用于建立和对比表面展示系统的质粒的构建50-54
• 3.4.2 表面展示的可行性验证54-55
• 3.4.3 表面展示SIV Gag抗原的重组耻垢分枝杆菌的构建55-58
• 3.5 小结58-59
• 第四章 总结与展望59-61
• 4.1 总结59
• 4.2 展望59-61
• 参考文献61-66
• 附录66-72
• 致谢72-73
• 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果73-7

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本文编号：308111