Cyp4v3 -/- 结晶样视网膜变性小鼠病程及脂代谢研究

发布时间：2021-03-18 18:35

　　目的:对结晶样视网膜变性（Bietti crystalline dystrophy,BCD）小鼠模型的表型进行鉴定,对该小鼠模型进行自然病程的观察并进行血液脂代谢组学的分析,并探索影响疾病发生发展的可能机制和评估该小鼠模型是否可作为合适的临床前治疗研究模型。方法:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Cyp4v3-/-的小鼠,并进行大量繁殖。首先对其进行视网膜免疫荧光的蛋白表达鉴定。Cyp4v3-/-结晶样视网膜变性小鼠分成两组,一组饲喂高脂饲料,一组饲喂普通饲料。C57BL/6J小鼠作为正常对照。对三组小鼠每4周进行眼底彩色照相,光学相干断层扫描（optical coherence tomography,OCT）,眼底自发荧光成像,视网膜电流图（electroretinogram,ERG）等检查,观察至20周。另外将C57BL/6J小鼠高脂饲喂8周,检查其眼底和进行ERG的检测。处死相同周龄的Cyp4v3-小鼠和野生型小鼠,取下其眼球,进行视网膜的切片以及HE染色和透射电镜观察。采集Cyp4v3-/-小鼠,野生型小鼠的血液,采用超高效液相色谱-质谱法进行非靶向脂代谢组学分析。结果... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．?Ａ．在Ｃ冲基因上下游各设计的一个ｓｇＲＮＡ图Ｂ．两个ｓｇＲＮＡ在小鼠胚胎内实际产生的??．

取相同周龄的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠和ＶＪ、鼠的视网膜进行眼球冰冻切片和??免疫荧光染色，检测ＣＹＰ４Ｖ３蛋白的表达。结果显示ＷＴ小鼠ＲＰＥ层可检测到??ＣＹＰ４Ｖ３蛋白的表达，而同龄小鼠则不表达（图３）。??Ｃｙｐ４ｖ３?ＤＡＰＩ?合并??■■■??图３．荧光显微镜下观察ＣＹＰ４Ｖ３蛋白表达，上图中ＷＴ小鼠视网膜ＲＰＥ层ＣＹＰ４Ｖ３的表达呈红色??荧光

３．?３小鼠眼底彩照，ＯＣＴ和自发荧光??１．通过２０周的观察发现，与Ｃ组野生型正常小鼠相比，Ａ组和Ｂ组的部??分小鼠眼底会出现黄色大片状病灶（图４），病灶可以出现在视网膜的??任何部位，且形态各异，而且数量不等，有的小鼠多，有的小鼠少，甚至有的小??鼠完全没有，ＯＣＴ上视网膜外层有高信号的颗粒物质堆积，颗粒物质似从ＲＰＥ层??出现，可向内累及至内核层，中间可形成空泡，病灶较轻者可仅有ＲＰＥ层及椭圆??体带的不连续及突起（图４）。??ｒ?ｉ??图４－１．?Ａ组小鼠眼底彩照及ＯＣＴ左图：视网膜周边多处黄色病灶右图：病灶处视网膜外层有??高信号的颗粒物质堆积，中间可形成空泡??图４－２．?Ｂ组小鼠眼底彩照及ＯＣＴ左图：视网膜周边黄色病灶右图：病灶处视网膜外层ＲＰＥ层??及椭圆体带的不连续及突起??１７??

【参考文献】：
期刊论文
[1]结晶样视网膜色素变性患者血脂浓度的变化[J]. 李孟达,殷晓贝,何婷,孙晓伟,李根林.  中华实验眼科杂志. 2015 (01)

博士论文
[1]结晶样视网膜变性及常染色体显性遗传性视神经萎缩的临床与基础研究[D]. 李华晋.北京协和医学院 2017



本文编号：3088741