小鼠卵泡发育过程中miRNA-224表达调控的分子机制研究
发布时间：2021-03-29 11:46
MicroRNAs （miRNAs）已经发现在卵巢卵泡发育过程中起着关键作用。但是,关于哺乳动物卵巢中miRNA基因自身的表达调控还知之甚少。本实验室之前报道miR-224通过靶向Smad4参与转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的卵泡颗粒细胞生长和雌二醇生成。本研究中,miR-224在颗粒细胞中表达的转录调控被进一步研究。我们的结果显示抑癌基因p53和NF-κB家族p65抑制TGF-β1诱导的pri-miR-224在颗粒细胞中的表达。核质分离和染色质免疫共沉淀实验证实TGF-β1能够诱导p53和p65由胞质向胞核转移和促进p53和p65结合在GABAA受体ε亚基（GABRE）（miR-224宿主基因）近端启动子区域上。p53和p65协同转录抑制GABRE启动子活性。进一步实验发现颗粒细胞中p53和p65可以通过抑制下游miR-224来上调SMAD4表达,这至少部分影响了miR-224和SMAD4对于颗粒细胞增殖和雌二醇分泌的效应。另外,本实验室之前的研究显示miR-224靶向于在排卵过程中对与卵丘扩展非常关键的基因正五聚蛋白3（Ptx3）, TGF-β1可以促进小鼠卵巢壁颗粒细胞和...
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 雌性生殖概述
1.1.1 雌性生殖系统
1.1.2 卵泡发育
1.2 MiRNAs与雌性生殖
1.2.1 MiRNAs生成和调控机制
1.2.2 MiRNAs对雌性生殖调控
第二章 研究工作与结果讨论
2.1 p53和NF-κB p65协同调控小鼠卵巢腔前颗粒细胞miR-224转录
2.1.1 引言
2.1.2 研究结果
2.1.2.1 p53和p65抑制miR-224宿主基因（GABRE）启动子活性
2.1.2.2 腔前颗粒细胞（mpGCs）中p53和p65在转录水平上调控miR-224表达
2.1.2.3 p53-p65相互作用影响miR-224宿主基因（GABRE）启动子活性
2.1.2.4 p53和p65通过miR-224介导的靶基因Smad4途径影响腔前颗粒细胞增殖和雌二醇（E2）分泌
2.1.3 结果分析与讨论
2.1.4 本节小结
2.2 MiR-224通过靶向Ptx3调控小鼠卵丘扩展
2.2.1 引言
2.2.2 研究结果
2.2.2.1 卵泡发育中TGF-β1,miR-224和PTX3表达
2.2.2.2 MiR-224抑制小鼠卵丘扩展
2.2.2.3 MiR-224抑制小鼠排卵
2.2.3 结果分析与讨论
2.2.4 本节小结
第三章 实验材料与方法
3.1 实验动物
3.2 实验试剂与寡核苷酸序列
3.3 生物信息学分析
3.4 基因组DNA抽提
3.5 质粒构建与转化
3.6 卵泡分离
3.7 细胞分离和培养
3.8 细胞转染和荧光素酶活性分析（Luciferase activity assay）
3.9 RNA抽提和反转录PCR（RT-PCR）
3.10 实时定量PCR（Real-time PCR）
3.11 免疫印迹（Western blotting）
3.12 细胞核质蛋白分离
3.13 染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation,ChIP）和sequential ChIP（re-ChIP）
3.14 免疫共沉淀（Immunoprecipitation assay）
3.15 细胞增殖检测和激素检测
3.16 酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）
3.17 腺病毒准备
3.18 COC分离和感染
3.19 腺病毒卵巢囊内注射
3.20 统计分析
参考文献
所获奖励和参加学术会议情况
致谢
攻读博士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
博士论文
[1]MiRNA-224参与小鼠卵泡发育调控作用的研究[D]. 姚桂东.中国科学技术大学 2011
本文编号：3107490
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 雌性生殖概述
1.1.1 雌性生殖系统
1.1.2 卵泡发育
1.2 MiRNAs与雌性生殖
1.2.1 MiRNAs生成和调控机制
1.2.2 MiRNAs对雌性生殖调控
第二章 研究工作与结果讨论
2.1 p53和NF-κB p65协同调控小鼠卵巢腔前颗粒细胞miR-224转录
2.1.1 引言
2.1.2 研究结果
2.1.2.1 p53和p65抑制miR-224宿主基因（GABRE）启动子活性
2.1.2.2 腔前颗粒细胞（mpGCs）中p53和p65在转录水平上调控miR-224表达
2.1.2.3 p53-p65相互作用影响miR-224宿主基因（GABRE）启动子活性
2.1.2.4 p53和p65通过miR-224介导的靶基因Smad4途径影响腔前颗粒细胞增殖和雌二醇（E2）分泌
2.1.3 结果分析与讨论
2.1.4 本节小结
2.2 MiR-224通过靶向Ptx3调控小鼠卵丘扩展
2.2.1 引言
2.2.2 研究结果
2.2.2.1 卵泡发育中TGF-β1,miR-224和PTX3表达
2.2.2.2 MiR-224抑制小鼠卵丘扩展
2.2.2.3 MiR-224抑制小鼠排卵
2.2.3 结果分析与讨论
2.2.4 本节小结
第三章 实验材料与方法
3.1 实验动物
3.2 实验试剂与寡核苷酸序列
3.3 生物信息学分析
3.4 基因组DNA抽提
3.5 质粒构建与转化
3.6 卵泡分离
3.7 细胞分离和培养
3.8 细胞转染和荧光素酶活性分析（Luciferase activity assay）
3.9 RNA抽提和反转录PCR（RT-PCR）
3.10 实时定量PCR（Real-time PCR）
3.11 免疫印迹（Western blotting）
3.12 细胞核质蛋白分离
3.13 染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation,ChIP）和sequential ChIP（re-ChIP）
3.14 免疫共沉淀（Immunoprecipitation assay）
3.15 细胞增殖检测和激素检测
3.16 酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）
3.17 腺病毒准备
3.18 COC分离和感染
3.19 腺病毒卵巢囊内注射
3.20 统计分析
参考文献
所获奖励和参加学术会议情况
致谢
攻读博士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
博士论文
[1]MiRNA-224参与小鼠卵泡发育调控作用的研究[D]. 姚桂东.中国科学技术大学 2011
本文编号：3107490
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/3107490.html
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