Wnt/β-catenin信号通路促进小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化

发布时间：2021-04-03 22:56

　　目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞定向分化过程中的功能。方法在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化过程中的三个不同阶段分别添加Wnt/β-catenin信号通路的激动剂CHIR99021;利用Western blot、qPCR以及免疫荧光等方法,检测胰岛细胞标志基因Pdx1、Ngn3、Pax4和Insulin1的表达情况;基于Tet-On表达调控系统,建立由小分子Doxcycline控制的β-catenin基因可诱导过表达胚胎干细胞系,在胰岛细胞形成的不同阶段进行诱导表达,观察其功能是否与CHIR99021类似;最后,利用慢病毒干扰系统,在干细胞中下调β-catenin的表达水平,观察其是否可以减弱CHIR99021在胰岛细胞形成过程中的功能。结果小鼠胚胎干细胞在三个不同时间段经过三种不同配方的溶液处理能够有效地分化成胰岛细胞。在胰岛细胞定向分化的早期和晚期阶段,添加CHIR99021和过表达β-catenin均可以提高胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的分化效率,表现为Pdx1和Insulin 1的表达上调（P<0.01）,而干扰β-catenin... 

【文章来源】：安徽医科大学学报. 2019,54(12)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

mESCs分化为胰岛细胞

CHIR在胰岛细胞定向分化中的作用

糖尿病一直没有特效的治疗方法,寻找替代材料和疗法现已成为临床上亟待解决的重大问题之一。本项目研究建立并优化了目前胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的分化方法,表明在胚胎干细胞向胰岛细胞分化的早期和晚期,用小分子CHIR处理可以有效地诱导胰岛细胞的生成效率。因为GSK-3抑制很多蛋白的活性,从而调控多个信号通路[7],所以接下来通过调控β-catenin基因的表达来确定CHIR确实通过Wnt/β-catenin信号发挥功能。结果表明过表达β-catenin能够模拟CHIR的作用,从而促进小鼠胚胎干细胞向胰岛细胞分化,而下调β-catenin基因的表达则会削弱CHIR的功能。因此,激活Wnt/β-catenin信号通路对于高质量胰岛素分泌细胞的高效产生具有促进作用。图4 β-catenin介导CHIR诱导mESCs向胰岛细胞分化的作用


本文编号：3117239