以乙脑病毒疫苗株为骨架的寨卡嵌合病毒疫苗的构建和鉴定

发布时间：2021-04-12 03:48

　　目的:构建乙脑/寨卡（JE/ZIKA）嵌合病毒感染性克隆,拯救病毒,并对嵌合病毒生物学特征和免疫学特征进行鉴定,以探索该嵌合病毒株是否可以成为寨卡病毒候选疫苗株。方法:用基因克隆技术把乙脑疫苗株SA14-14-2的prM/E基因用寨卡病毒prM/E基因序列进行替换,构建JE/ZIKA嵌合病毒感染性克隆,并以其为模板体外转录得到RNA,将RNA电转染导入BHK21细胞包装获得JE/ZIKA嵌合病毒;采用噬斑法、间接免疫荧光技术和测序法鉴定嵌合病毒,并对嵌合病毒的生长特性、遗传稳定性和热稳定性进行鉴定;用嵌合病毒脑内、皮下和腹腔感染清洁级昆明鼠,测定嵌合病毒的脑内神经毒力、皮下神经毒力及腹腔神经毒力;并用嵌合病毒免疫昆明鼠,噬斑减少中和试验（PRNT）检测嵌合病毒产生中和抗体的能力;用不同剂量JE/ZIKA嵌合病毒免疫昆明鼠,2周后用JE/ZIKA脑内攻击,统计对昆明鼠的免疫保护能力;用JE/ZIKA嵌合病毒及JEV SA14-14-2分别免疫昆明鼠,并分别用乙脑野毒株SA14和JE/ZIKA攻击免疫鼠,统计病毒间的交叉免疫保护情况。结果:酶切实验结果表明成功构建JE/ZIKA嵌合病毒感染... 

【文章来源】：川北医学院四川省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

嵌合病毒JE/ZIKA感染性克隆的构建Fig1.ConstructionflowchartofinfectioncloneofJE/ZIKAchimericvirus

图 3 质粒 pACNR-F1+F2+F3+F4 的方向鉴定DL2000）；1：pACNR-F1+F2+F3+F4；2：pACNRirectional identification of plasmid pACNR-F1+F2000）；1：pACNR-F1+F2+F3+F4；2：pACNR- 5’端的 pACNR-F1+F2+F3+F4 质粒的性内切酶 BglII 和 KasI 双酶切处理后4），获得 0.4kb、0.7kb、1.1kb 大小毒 JE/ZIKA 全长 cDNA 质粒的鉴定性内切酶处理后进行 1%琼脂糖凝胶I 和 XhoI 双酶切后得到 7.5kb 和 5.8kI 双酶切处理后得 0.3kb、0.4kb、0.6kb

图 4 质粒 pACNR-F1+F2+F3+F4 的酶切鉴定准（DL2000）；1：pACNR-F1+F2+F3+F4 /BglII+KasI；2：pACM2：DNA 分子量标准（DL15000）estriction endonuclease analysis of plasmid pACNR-F1+F2DL2000）；1：pACNR-F1+F2+F3+F4 /BglII+KasI；2：pACM2：DNA marker（DL15000）

【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2感染性克隆的构建、鉴定及稳定性分析[J]. 杨健,杨会强,李竹石,林华,赵宇,刘莉,葛永红,乔代蓉,曹毅,曾献武,李玉华.  中华微生物学和免疫学杂志. 2013 (02)
[2]病毒嵌合疫苗的研究进展[J]. 庄敏,李迪.  国外医学(免疫学分册). 2004(03)
[3]抗登革病毒的药物研究进展[J]. 何金洋,郭兴伯,朱宇同.  广州中医药大学学报. 2003(02)



本文编号：3132553