PCSK9单克隆抗体2种活性检测方法的建立及应用

发布时间：2021-04-30 22:39

　　背景:大量研究表明,循环中LDL-C水平升高,是引发动脉粥样硬化及其相关心血管疾病的重要危险因素。目前广泛用于临床上降脂的他汀类药物,并不能将所有人群血清LDL-C降至理想水平并有效防治心血管疾病。以此为背景,国内外掀起了抗前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9）单克隆抗体降脂药物的研发热潮。目前,尚没有公开发表可直接应用于PCSK9单抗研发生产过程的抗原结合活性和生物学活性检测方法。目的:本研究拟建立PCSK9单克隆抗体抗原结合活性和生物学活性测定方法,用于PCSK9单抗药物研究开发过程中的活性质量控制工作,为同类单克隆抗体药物活性方法的开发提供借鉴。方法:1、在本实验室前期研究的基础上,经发酵、纯化,得到抗体蛋白原液。分别采用CIEF、CE-SDS、紫外分光光度法、凝胶限度检查法、酸度计法等方法测定原液的等电点、纯度、含量、杂质（蛋白A和内毒素）和PH值,对其质量进行检定。2、根据间接ELISA法的实验步骤,依次考察三个关键实验因素:1)三种二抗:HRP-山羊抗人IgG Fc、HRP-山羊抗人... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、PCSK9单克隆抗体的表达、纯化及质量分析
    1.1 对象和方法
        1.1.1 主要试剂
        1.1.2 主要设备及耗材
        1.1.3 实验方法
    1.2 结果
        1.2.1 发酵表达结果
        1.2.2 纯化结果
        1.2.3 质量分析结果
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、抗原结合活性检测方法的建立
    2.1 对象与方法
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器及关键耗材
        2.1.3 主要试剂配制
        2.1.4 实验方法
    2.2 结果
        2.2.1 关键实验条件确定
        2.2.2 方法验证结果
    2.3 讨论
        2.3.1 间接ELISA法
        2.3.2 包被体系选择
        2.3.3 方法验证
    2.4 小结
三、生物学活性检测方法的建立
    3.1 对象和方法
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要设备及关键耗材
        3.1.4 主要溶液配制
        3.1.5 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 细胞培养结果
        3.2.2 关键实验条件选择确定
        3.2.3 方法验证结果
    3.3 讨论
        3.3.1 细胞要求
        3.3.2 关键实验条件探索
        3.3.3 方法验证
    3.4 小结
四、两种活性检测方法的应用
    4.1 对象和方法
        4.1.1 实验试剂
        4.1.2 主要设备及关键耗材
        4.1.3 主要试剂配制
        4.1.4 实验方法
    4.2 结果
        4.2.1 三批PCSK9单克隆抗体抗原结合活性检测结果
        4.2.2 三批PCSK9单克隆抗体生物学活性检测结果
    4.3 讨论
    4.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 PCSK9靶向降脂药物的研究现状以及未来的前景分析
    综述参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2017》概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,蒋立新,胡盛寿.  中国循环杂志. 2018(01)
[2]五种常见老年慢性疾病住院医疗费用调查分析[J]. 刘述益,曹颖,李勇.  四川医学. 2017(11)
[3]中国抗体药物产业现状与发展前景[J]. 马杉姗,马素永,赵广荣.  中国生物工程杂志. 2015(12)
[4]单克隆抗体类生物治疗药物研究进展[J]. 王兰,朱磊,徐刚领,高凯.  中国药学杂志. 2014(23)
[5]血脂与心血管疾病关系的研究进展[J]. 解武祥,武阳丰.  中国医学前沿杂志(电子版). 2012(12)
[6]重组人骨形成蛋白-2的质量控制[J]. 史新昌,韩春梅,李响,刘兰,丁有学,饶春明.  中国生物制品学杂志. 2008(07)
[7]生物素-亲和素标记技术[J]. 孔令青,李勇,高洪,严玉霖.  动物医学进展. 2008(04)
[8]生物素——亲和素系统及其应用[J]. 徐荣臻.  微生物学免疫学译刊. 1987(03)



本文编号：3169616