MSC外泌体来源的miR-223-3p抑制早期小鼠aGvHD的发生

发布时间：2021-05-05 22:36

　　目的:探讨不同组织来源间充质干细胞（MSC）分泌的外泌体中Micro RNA（mi RNA）对小鼠急性移植物抗宿主病（a Gv HD）发生发展的影响。方法:（1）分别从C57BL/6小鼠骨实质和人脐带组织中分离培养MSC,采用流式细胞术鉴定其细胞表型,并进行成脂和成骨的诱导分化。14day后采用油红O染色检测其成脂分化能力,碱性磷酸酶（ALP）染色鉴别其成骨分化能力;实时荧光定量PCR（q-PCR）检测分化过程中成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达以及成骨分化关键转录因子Osteocalin和Runx2的表达。进一步,采用无血清培养基培养MSC,收集培养上清,利用外泌体试剂盒分离纯化外泌体。采用流式细胞术、蛋白免疫印迹（western blot）、纳米追踪分析技术和透射电镜等方法,依据外泌体大小、形态、膜表面标志物鉴定分离获得的外泌体,并对外泌体的mi RNA进行测序,结合生物信息学分析,选择保守性强且高表达的mi RNA-223-3p（mi R-223-3p）进行进一步的研究。（2）以正常C57BL/6为受体小鼠,由尾静脉输注射小鼠骨实质来源MSC（mb MSC）,48h后采集... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

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Abstract
1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要材料和试剂
        2.1.2 主要设备和软件
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 人脐带来源的MSC和小鼠骨实质来源的MSC的分离培养和鉴定
        2.2.2 两种不同来源MSC外泌体的分离鉴定与测序
    2.3 正常C57BL/6小鼠移植小鼠骨实质来源的MSC
    2.4 huMSC外泌体与HUVEC共培养
    2.5 miR-223-3pmimic瞬时转染HUVEC
    2.6 miR-223-3p治疗小鼠aGvHD
        2.6.1 建立小鼠aGVHD模型
        2.6.2 miR-223-3p对小鼠aGvHD的疗效检测
    2.7 统计学分析
3 实验结果
    3.1 小鼠骨实质来源MSC的分离培养与鉴定
    3.2 人脐带来源MSC的分离培养与鉴定
    3.3 小鼠骨实质来源MSC外泌体的分离纯化与鉴定
    3.4 人脐带来源MSC外泌体的分离纯化与鉴定
    3.5 mbMSC和huMSC外泌体的miRNA测序结果
    3.6 C57BL/6小鼠移植MSC后血清外泌体的miR-223-3p表达升高
    3.7 外泌体通过miR-223-3p调控靶基因ICAM-1的表达
    3.8 外源合成miR-223-3pmimic可抑制HUVEC的ICAM-1表达
    3.9 miR-223-3p可减轻小鼠造血干细胞移植后早期aGvHD的发生
讨论
结论
本论文的创新点
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]外泌小体在白血病细胞和骨髓间充质干细胞交叉对话中的作用[J]. 杨雅芝,张小燕,房丽君,万倩,李剑.  中国实验血液学杂志. 2017(04)
[2]Mesenchymal stem cells-derived exosomal microRNAs contribute to wound inflammation[J]. Dongdong Ti,Haojie Hao,Xiaobing Fu,Weidong Han.  Science China（Life Sciences）. 2016(12)



本文编号：3170711