Sel1L基因对CD4 + T细胞功能的影响

发布时间：2021-05-15 22:02

　　目的:流行病学表明,自身免疫性疾病作为人类生命安全一大威胁,其患病率正在逐年递增,且无很好的治疗手段。而CD4⁺T细胞与多种自身免疫病的发生、发展密切相关,其中Th1细胞和Th17细胞是其致病的主要淋巴细胞群体,但其具体发病机制尚不清楚。有研究表明,内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）引起的未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）在自身免疫病的发生、发展中起到了重要作用。而由Lin-12样抑制子/增强子（Lin-12-like suppressor/enhancer,Sel1L）组成的内质网相关蛋白降解复合体（endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD）在维持内质网稳态,清除未折叠及错误折叠蛋白中起到了不可或缺的作用。因此,本课题通过Cre-loxP重组酶系统建立了T细胞特异性敲除Sel1L基因小鼠模型,初步探讨了Sel1L分子对CD4⁺T细胞活化、增殖与亚群分化的调控作用,进而揭示了Sel1L分子在自身免疫性... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 内质网应激(ERS)与未折叠蛋白反应(UPR)
        1.1.1 内质网质量控制系统
        1.1.2 PERK-eIF2α信号途径
        1.1.3 ATF6信号途径
        1.1.4 IRE1信号途径
    1.2 Sel1L分子
        1.2.1 Sel1L与ERAD
        1.2.2 Sel1L与UPR
    1.3 UPR与自身免疫病
    1.4 T淋巴细胞
        1.4.1 T淋巴细胞亚群分化
        1.4.2 T淋巴细胞活化与TCR信号通路
    1.5 本实验研究目的、方法、技术路线及课题意义
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究方法
        1.5.3 技术路线
        1.5.4 研究意义
第二章 T细胞定向敲除Sel1L基因小鼠模型的建立
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠哺育与配型
        2.2.2 小鼠基因型鉴定
    2.3 实验结果
    2.4 讨论
第三章 Sel1L基因对活化CD4~+T细胞增殖及凋亡的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验仪器与耗材
        3.1.3 实验商品化试剂
        3.1.4 实验自配试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 流式细胞术检测脾脏淋巴细胞表面标志CD69、CD25
        3.2.2 CFSE标记法检测淋巴细胞增殖
        3.2.3 Ki67核染色检测淋巴细胞增殖
        3.2.4 Anti-CD3/anti-CD28及ConA诱导脾脏淋巴细胞凋亡
    3.3 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 Sel1L不引起T淋巴细胞活化强度的改变
        3.4.2 Sel1L基因敲除促进T淋巴细胞增殖
        3.4.3 Sel1L基因敲除促进活化T淋巴细胞凋亡
    3.5 讨论
第四章 Sel1L基因调节CD4~+T淋巴细胞分化
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 实验仪器与耗材
        4.1.3 实验商品化试剂
        4.1.4 自配试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 胞内因子染色检测CD4~+T细胞压群Th1、Th2及Th17细胞
        4.2.2 流式细胞术核染色检测Treg细胞
        4.2.3 流式细胞术核染色检测转录因子T-bet、ROR-γt
        4.2.4 Th1、Th17体外定向诱导分化
        4.2.5 TCR信号通路相关指标检测
    4.3 统计学分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 Sel1L缺失影响脾脏活化CD4~+T细胞亚群
        4.4.2 Sel1L缺失上调Th1、Th17特异性转录因子T-bet、ROR-γt
        4.4.3 Sel1L缺失促进Th1、Th17分化
        4.4.4 Sel1L缺失激活TCR信号通路
    4.5 讨论
第五章 Sel1L基因影响CD4~+T细胞UPR信号通路
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 实验仪器与耗材
        5.1.3 实验试剂
    5.2 实验方法
        5.2.1 CD4~+T细胞UPR相关蛋白检测
    5.3 实验结果
    5.4 讨论
第六章 主要结论和展望
    6.1 主要结论
    6.2 展望
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的文章及专利申请



本文编号：3188409