表皮生长因子受体调节中枢神经元内在生长活性的机制

发布时间：2021-05-21 06:46

　　中枢神经内在生长活性（intrinsic growth activity）呈发育依赖性丢失，研究证实发育成熟的神经组织一旦损伤后生长能力很低的原因与神经生长发育的调控机制有关。一个新的关于CNS损伤后轴突再生失败的假设是——控制中枢神经元生长发育的基因在成熟的神经元中被抑制，以致于神经元内在生长活性低下，从而在损伤后无法有效的再生。发育时期的神经生长属于生长因子依赖性生长，在诸多生长因子介导的信号通路中PI3K/Akt这条信号通路被认为是与神经生长关系最密切的。PI3K/Akt信号通路中的作用底物哺乳动物雷帕霉素作用靶点mTOR（mammalian target ofrapamycin）是决定中枢神经元内在生长活性的一个关键调控物，mTOR表达水平的高低直接决定了神经元生长能力的强弱。而表皮生长因子受体EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）与中枢神经发育关系密切，且磷酸化的EGFR能够激活mTOR。以上事实均提示EGFR与中枢神经元的发育及生长有着密切的关联。因此本研究试图找到EGFR与中枢神经元发育之间的联系，以此为切入点，探寻中枢神经元内在生长... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
第1章 文献综述
    1.1 文献综述 1
    1.2 文献综述 2
第2章 不同发育阶段脊髓组织中 EGFR 和 MTOR 的表达及相关性研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 大鼠脊髓组织的取材
        2.2.2 脊髓组织冰冻切片标本的制备
        2.2.3 脊髓组织冰冻切片的免疫组织化学染色
        2.2.4 脊髓组织总蛋白的提取及蛋白浓度的测定
        2.2.5 Western-blot 检测脊髓组织中 EGFR 和 mTOR 蛋白的表达
        2.2.6 不同发育阶段脊髓组织总 RNA 的提取及 RT-PCR 实验
        2.2.7 统计学处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 不同发育阶段的脊髓组织中 EGFR 和 mTOR 的表达
        2.3.2 PI3K/Akt 信号通路在脊髓组织不同发育阶段的活化状态的检测
        2.3.3 不同发育阶段的大鼠脊髓组织免疫化学染色检测 EGFR 和mTOR
    2.4 实验讨论
    2.5 小结
第3章 大鼠皮质神经干细胞的培养及向神经元诱导分化
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 神经干细胞的分离、培养、鉴定
        3.2.2 神经干细胞向神经元诱导分化培养与鉴定
        3.2.3 全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）促进神经元分化的实验
        3.2.4 膜片钳检测诱导培养神经元的分化程度
    3.3 实验结果
        3.3.1 神经干细胞原代培养与鉴定
        3.3.2 神经干细胞向神经元诱导培养与鉴定
        3.3.3 全反式维甲酸（ATRA）促进神经干细胞向神经元分化
        3.3.4 膜片钳检测培养的神经元分化成熟度
    3.4 实验讨论
    3.5 小结
第4章 不同表达水平的 EGFR 对培养的神经元生长能力的影响及机制的探讨
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验对象
        4.1.2 主要仪器
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 调控 EGFR 表达的质粒、病毒及细胞株
    4.2 实验方法
        4.2.1 神经元的培养
        4.2.2 慢病毒载体的制备和转导
        4.2.3 western-blot 检测不同培养条件下神经元 tau、β-tubulin、NF、p-Akt~(S473)、p-mTOR~(S2448)蛋白的表达
        4.2.4 雷帕霉素（Rapamycin）对神经元毒性实验
    4.3 结果
        4.3.1 pLEGFP-EGFR 和 vshRNA-EGFR 转染效果
        4.3.2 雷帕霉素对培养细胞的毒性实验
        4.3.3 体外不同 EGFR 表达水平下神经元生长能力的检测
        4.3.4 雷帕霉素（Rapamycin）对体外 EGFR 过表达水平下的神经元生长能力的影响
        4.3.5 Rapamycin 对 PI3K/Akt 信号通路的状态的影响
    4.4 实验讨论
    4.5 小结
全文讨论
结论
创新点
参考文献
博士期间已发表的论文
博士期间主持的课题
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]表皮生长因子及其受体在中枢神经系统损伤和修复中的作用[J]. 蒋娟,杨双汇,王秀娇,潘柏宏.  国际病理科学与临床杂志. 2013(02)
[2]NEP1-40促进高苯丙氨酸损伤大鼠神经元Nogo A表达[J]. 黄成姣,黄丽素,张拥军,叶军,李端,顾学范.  基础医学与临床. 2011(03)
[3]下调PTEN基因对全脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的保护作用研究[J]. 申崇标,陈力学,刘宝松,周冀英,曾照芳,邵阳.  解放军医学杂志. 2010(07)
[4]Intrinsic control of axon regeneration[J]. Zhigang He F.M. Kirby Neurobiology Center, Children’s Hospital, and Department of Neurology, Harvard Medical School, 300 Longwood Avenue, Boston, MA 02115, USA..  Journal of Biomedical Research. 2010(01)
[5]促成年脊髓再生研究的新方向:提高成年神经元内在生长能力[J]. 杨萍.  生理科学进展. 2009(01)
[6]LINGO-1多克隆抗体对大鼠脊髓损伤模型干预的可行性分析[J]. 吕俊,徐如祥,法志强,姜晓丹,鲁辛,柯以铨,蔡颖谦,杜谋选,邹雨汐,秦玲莎.  中华神经医学杂志. 2009 (05)



本文编号：3199247