小鼠子宫蜕膜细胞表达CD82/KAI1抑制外胎盘锥的侵袭
发布时间：2021-06-06 02:38
CD82/KAI1是一种广泛存在肿瘤抑制因子，它能抑制肿瘤细胞的能动性和侵袭性。肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一，在肿瘤细胞的生物学特性中，侵袭性和转移性尤为关键，这也是恶性肿瘤的重要标志。比较发现，在哺乳动物胚胎着床时，滋养层细胞的侵袭能力和行为方式与肿瘤细胞十分相似。在小鼠妊娠过程中，胚胎滋养层细胞侵入母体子宫内膜与蜕膜共同构成胎盘，以保证妊娠的正常进行。滋养层细胞的过度侵入或侵入不足都会对母体和胚胎的发育造成伤害。根据本课题组前期实验结果表明：CD82/KAI1在小鼠的子宫内膜上均有表达，因此推测，CD82/KAI1对蜕膜细胞促使滋养层侵袭有影响。目的：研究CD82/KAI1在小鼠子宫蜕膜细胞及外胎盘锥的表达及其对外胎盘锥侵袭的影响。方法：1.将设计好的CD82/KAI1干扰序列插入pSES-HUS载体中，酶切鉴定和测序检测，构建pAdeasy-SES-HUS-CD82/KAI1siRNA和pAdeasy-SES-HUS载体；2.体外分离培养小鼠子宫基质细胞并诱导蜕膜化，采用RT-PCR、westernblot技术检测CD82/KAI1在蜕膜细胞中的表达；3.取d8小鼠子宫，冰...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pSES-HUS-CD82/KAI1siRNA的测序鉴定
图1 .3 重 组腺 病 毒 载体 的Pa cⅠ 酶 切鉴 定准;1 :p A d - e a s y -1 ;2 :p A d e a s y -S E S- H U S; 3 :p A d eFi g 1 . 3 D ig e s ti o n o f re co mb in a nt pl a s m id w it h a s y -S ES -H U S - CD 8 2/ KA I 1s i RN A H U S -C D8 2 / KA I 1 s i R NA 、p Ad e a s y- S ES -H 胞， 2 4 h 在荧 光 显 微镜 下 可观 察到 少 量的 渐增 多， 在 72 h 后 8 0% 以 上的 细 胞发 出 红 ， 收 获 病 毒 原 液 ， 将 其 继 续 感 染 HE K 2 大 量 扩 增 。 滴 度 测 试 显 示 重 组 腺 病e a s y- S ES -H US 滴度 分 别高 达 7. 2× 10 11 pf u
4 . 4 k b图1 .3 重 组腺 病 毒 载体 的Pa cⅠ 酶 切鉴 定M: λ - H in d ⅢD N A标 准;1 :p A d - e a s y -1 ;2 :p A d e a s y -S E S- H U S; 3 :p A d e a s y -S E S -H U S -C D 8 2 s iR N AFi g 1 . 3 D ig e s ti o n o f re co mb in a nt pl a s m id w it h Pa c Ⅰ2 .3 重组 p Ad e a s y -S ES -H U S - CD 8 2/ KA I 1s i RN A 腺病 毒 的 包装 pA d e a s y- S ES -H U S -C D8 2 / KA I 1 s i R NA 、p Ad e a s y- S ES -H U S 经 P ac Ⅰ 酶 切 、纯 化后转 染 HE K 2 9 3 细 胞， 2 4 h 在荧 光 显 微镜 下 可观 察到 少 量的 红色 荧 光出 现， 随 着 培 养时 间 延长 荧光 逐 渐增 多， 在 72 h 后 8 0% 以 上的 细 胞发 出 红色 荧 光 （图 2- 4 ） ，10 ~ 1 天 后 病 毒 颗 粒 成 熟 ， 收 获 病 毒 原 液 ， 将 其 继 续 感 染 HE K 2 9 3 细 胞 进 行 3 轮 扩 增 的病 毒 液 ， 病 毒 得 到 大 量 扩 增 。 滴 度 测 试 显 示 重 组 腺 病 毒 Ad e a s y -S ES - HU S C D8 2 s i R NA 和 Ad e a s y- S ES -H US 滴度 分 别高 达 7. 2× 10 11 pf u / m l 、7 . 5 ×1 0 1 1pf u / m l。
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组腺病毒CD82/KAI1对小鼠子宫基质细胞内α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin蛋白表达的影响[J]. 尉晓蔚,张倩,谭冬梅,赵邦霞,何通川,谭毅. 第三军医大学学报. 2009(07)
[2]肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在假孕小鼠子宫的表达及其对小鼠胚胎着床的影响[J]. 谭冬梅,赵邦霞,尉晓蔚,彭洪英,赖国旗,何明忠,谭毅. 生殖与避孕. 2007(09)
[3]肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1基因在小鼠子宫内膜的动态表达[J]. 王焕英,谭冬梅,何明忠,王立芝,谭毅. 生殖与避孕. 2007(01)
[4]KAI1/CD82在早孕小鼠子宫内膜组织的表达研究[J]. 何明忠,王焕英,谭冬梅,谭毅. 四川动物. 2006(04)
[5]KAI1/CD82蛋白表达与食管癌淋巴结转移的关系[J]. 季润元,沈阳,王成海,孙泽,冯振卿. 实用癌症杂志. 2004(04)
[6]非小细胞肺癌中KAI1/CD82和CD44的表达水平与患者临床病理特征之间的关系[J]. 陈清勇,林仙明,周建英,安舟,杨凌,江中勇. 中华结核和呼吸杂志. 2004(02)
[7]抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响[J]. 刘莉,李祖国,杨光之,丁彦青. 第一军医大学学报. 2003(06)
[8]KAI1/CD82 gene expression in benign prostatic hyperplasia and late-stage prostate cancer in Chinese[J]. Wei-Lie HU;Ying-Qu LI;Hui-Xu HE;Qing-Rong LI;Ye TIAN;Ri-Quan LAI;Hua MEI Depertment of Urology, the General Hospital of Guangzhou Military Area, Chinese People’s Libertion Army, Guangzhou, China Life Science College Sun Yat-Sen Universty, Guangzhou,China First Affiliated Hopital, Sun Yat-Sen University of Medical Science, Guangzhou,China. Asian Journal of Andrology. 2000(03)
[9]肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在不同转移潜能癌细胞中的表达[J]. 李珊珊,方伟岗,钟镐镐,由江峰,沈琼. 中华医学杂志. 1999(09)
[10]RNAi与肿瘤相关基因及在肿瘤治疗中的研究[J]. 喻彬,陈炜. 国际泌尿系统杂志. 2007 (04)
本文编号：3213423
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pSES-HUS-CD82/KAI1siRNA的测序鉴定
图1 .3 重 组腺 病 毒 载体 的Pa cⅠ 酶 切鉴 定准;1 :p A d - e a s y -1 ;2 :p A d e a s y -S E S- H U S; 3 :p A d eFi g 1 . 3 D ig e s ti o n o f re co mb in a nt pl a s m id w it h a s y -S ES -H U S - CD 8 2/ KA I 1s i RN A H U S -C D8 2 / KA I 1 s i R NA 、p Ad e a s y- S ES -H 胞， 2 4 h 在荧 光 显 微镜 下 可观 察到 少 量的 渐增 多， 在 72 h 后 8 0% 以 上的 细 胞发 出 红 ， 收 获 病 毒 原 液 ， 将 其 继 续 感 染 HE K 2 大 量 扩 增 。 滴 度 测 试 显 示 重 组 腺 病e a s y- S ES -H US 滴度 分 别高 达 7. 2× 10 11 pf u
4 . 4 k b图1 .3 重 组腺 病 毒 载体 的Pa cⅠ 酶 切鉴 定M: λ - H in d ⅢD N A标 准;1 :p A d - e a s y -1 ;2 :p A d e a s y -S E S- H U S; 3 :p A d e a s y -S E S -H U S -C D 8 2 s iR N AFi g 1 . 3 D ig e s ti o n o f re co mb in a nt pl a s m id w it h Pa c Ⅰ2 .3 重组 p Ad e a s y -S ES -H U S - CD 8 2/ KA I 1s i RN A 腺病 毒 的 包装 pA d e a s y- S ES -H U S -C D8 2 / KA I 1 s i R NA 、p Ad e a s y- S ES -H U S 经 P ac Ⅰ 酶 切 、纯 化后转 染 HE K 2 9 3 细 胞， 2 4 h 在荧 光 显 微镜 下 可观 察到 少 量的 红色 荧 光出 现， 随 着 培 养时 间 延长 荧光 逐 渐增 多， 在 72 h 后 8 0% 以 上的 细 胞发 出 红色 荧 光 （图 2- 4 ） ，10 ~ 1 天 后 病 毒 颗 粒 成 熟 ， 收 获 病 毒 原 液 ， 将 其 继 续 感 染 HE K 2 9 3 细 胞 进 行 3 轮 扩 增 的病 毒 液 ， 病 毒 得 到 大 量 扩 增 。 滴 度 测 试 显 示 重 组 腺 病 毒 Ad e a s y -S ES - HU S C D8 2 s i R NA 和 Ad e a s y- S ES -H US 滴度 分 别高 达 7. 2× 10 11 pf u / m l 、7 . 5 ×1 0 1 1pf u / m l。
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组腺病毒CD82/KAI1对小鼠子宫基质细胞内α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin蛋白表达的影响[J]. 尉晓蔚,张倩,谭冬梅,赵邦霞,何通川,谭毅. 第三军医大学学报. 2009(07)
[2]肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在假孕小鼠子宫的表达及其对小鼠胚胎着床的影响[J]. 谭冬梅,赵邦霞,尉晓蔚,彭洪英,赖国旗,何明忠,谭毅. 生殖与避孕. 2007(09)
[3]肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1基因在小鼠子宫内膜的动态表达[J]. 王焕英,谭冬梅,何明忠,王立芝,谭毅. 生殖与避孕. 2007(01)
[4]KAI1/CD82在早孕小鼠子宫内膜组织的表达研究[J]. 何明忠,王焕英,谭冬梅,谭毅. 四川动物. 2006(04)
[5]KAI1/CD82蛋白表达与食管癌淋巴结转移的关系[J]. 季润元,沈阳,王成海,孙泽,冯振卿. 实用癌症杂志. 2004(04)
[6]非小细胞肺癌中KAI1/CD82和CD44的表达水平与患者临床病理特征之间的关系[J]. 陈清勇,林仙明,周建英,安舟,杨凌,江中勇. 中华结核和呼吸杂志. 2004(02)
[7]抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响[J]. 刘莉,李祖国,杨光之,丁彦青. 第一军医大学学报. 2003(06)
[8]KAI1/CD82 gene expression in benign prostatic hyperplasia and late-stage prostate cancer in Chinese[J]. Wei-Lie HU;Ying-Qu LI;Hui-Xu HE;Qing-Rong LI;Ye TIAN;Ri-Quan LAI;Hua MEI Depertment of Urology, the General Hospital of Guangzhou Military Area, Chinese People’s Libertion Army, Guangzhou, China Life Science College Sun Yat-Sen Universty, Guangzhou,China First Affiliated Hopital, Sun Yat-Sen University of Medical Science, Guangzhou,China. Asian Journal of Andrology. 2000(03)
[9]肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在不同转移潜能癌细胞中的表达[J]. 李珊珊,方伟岗,钟镐镐,由江峰,沈琼. 中华医学杂志. 1999(09)
[10]RNAi与肿瘤相关基因及在肿瘤治疗中的研究[J]. 喻彬,陈炜. 国际泌尿系统杂志. 2007 (04)
本文编号：3213423
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