加味阳和汤对膝骨关节炎大鼠模型基质金属蛋白酶调控及软骨保护作用研究

发布时间：2021-06-09 20:29

　　目的:观察加味阳和汤对软骨细胞MMP-3,9,13及Col2a调控作用及对碘乙酸诱导KOA模型大鼠的软骨保护作用。方法:软骨细胞提取于3周龄SD大鼠关节软骨,第三代软骨细胞加入梯度浓度加味阳和汤干预后使用IL-1β诱导炎症。MTT检测加味阳和汤最佳干预浓度。Western Blot检测MMP-3,9,13及Col2a表达。组织病理学切片KOA大鼠模型软骨退变情况并行Mankin评分。结果:Western Blot结果示加味阳和汤能有效下调异常增高的MMP-3、9、13并上调Col2a表达。Mankin评分结果提示加味阳和汤能有效延缓退变。结论:加味阳和汤可通过抑制MMPs表达从而保护软骨。 

【文章来源】：江西中医药. 2020,51(03)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

…镜下观察软骨及甲苯胺蓝染色结果

·59·江西中医药2020年03月第03期总第51卷第447期●中药研究●表明造模成功（图1）。模型组及给药组均随干预进程出现不同程度恢复，其中给药组精神、活动情况改善优于模型组。空白组（4周）…………………………………………………………………………造模组（4周）图1…造模组与空白组软骨退变对比2.2…软骨细胞形态特征及染色鉴定第二代软骨细胞72h（4x）……………………第三代软骨细胞24h（10x）图2…镜下观察软骨及甲苯胺蓝染色结果原代软骨细胞24h左右即可贴壁，可见少量细胞呈多角形或不规则状缓慢生长，传代后增殖速度变快原代约需6d可传至下一代，随后每代需3~4d。第四代后逐渐失去软骨细胞形态特征。甲苯胺蓝染色如图2所示，细胞核呈深蓝，胞浆及间质呈淡蓝色，表明提取及培养所得为软骨细胞且纯度较好，可用于后续实验。2.3…MTT比色法筛选最佳干预条件…MTT结果显示，800μg/mL及1000μg/mL组软骨细胞增殖度在24h，48h及72h条件下均低于100，200，400μg/mL组。各浓度组在培养48h及72h时，细胞增殖度均低于各自相应浓度组培养24h的细胞增殖度。且48h及72h各浓度组内均出现不同程度软骨细胞生长抑制（P<0.05）。因此，800μg/mL及1000μg/mL组及48h、72h的培养时长不适用于后续实验，故本实验选取100，200，400μg/mL加味阳和汤干预软骨细胞培养24h为干预条件（图3）。图3…MTT比色法筛选不同浓度加味阳和汤干预软骨细胞条件2.4…MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a蛋白表达水平比较…IL-1β组MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a表达与空白组均有显著差异（P<0.001）。100，200，400μg/mL加味阳和汤干预后显示，加味阳和汤干预24h能降低软骨细胞内MMP-3、MMP-9及MMP

得为软骨细胞且纯度较好，可用于后续实验。2.3…MTT比色法筛选最佳干预条件…MTT结果显示，800μg/mL及1000μg/mL组软骨细胞增殖度在24h，48h及72h条件下均低于100，200，400μg/mL组。各浓度组在培养48h及72h时，细胞增殖度均低于各自相应浓度组培养24h的细胞增殖度。且48h及72h各浓度组内均出现不同程度软骨细胞生长抑制（P<0.05）。因此，800μg/mL及1000μg/mL组及48h、72h的培养时长不适用于后续实验，故本实验选取100，200，400μg/mL加味阳和汤干预软骨细胞培养24h为干预条件（图3）。图3…MTT比色法筛选不同浓度加味阳和汤干预软骨细胞条件2.4…MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a蛋白表达水平比较…IL-1β组MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a表达与空白组均有显著差异（P<0.001）。100，200，400μg/mL加味阳和汤干预后显示，加味阳和汤干预24h能降低软骨细胞内MMP-3、MMP-9及MMP-13表达，提高Col2a蛋白表达。其中，400μg/mL组相比100μg/mL及200μg/mL组干预效果更显著，差异有统计学意义（P<0.05）（图4，表1）。注：1……溶媒组；2……IL-1β组；3……IL-1β+100μg/mL加味阳和汤组；4…IL-1β+200μg/mL加味阳和汤组；5…IL-1β+400μg/mL加味阳和汤组图4…不同浓度加味阳和汤对软骨细胞MMPs及Col2a表达的影响表1…各组MMPs及Col2a指标表达情况（，n=3）组别MMP-3MMP-9MMP-13Col2a溶媒组0.273±0.0390.272±0.0170.242±0.1491.911±0.229模型组2.127±0.288&&&2.016±0.217&&&2.504±0.543&&&0.338±0.157&&&低剂量组1.492±0.159**###1.449±0.167***###1.557±0.199**##0.683±0.138##中剂量组0.7

【参考文献】：
期刊论文
[1]关节镜下观察加味阳和汤治疗膝骨性关节炎的临床疗效[J]. 邓文毅,陈岗,杨凤云,谢品辉,王丽华,钟世荣.  中国中医急症. 2012(05)
[2]加味阳和汤治疗膝骨性关节炎临床疗效观察[J]. 陈岗,杨凤云,王丽华,王力,胡立敏,杨军平,余扬帆,潘鸿志.  中国中医骨伤科杂志. 2009(07)



本文编号：3221264