RANKL基因转染对骨髓间充质干细胞RANKL、OPG表达影响研究

发布时间：2021-06-17 14:39

　　目的:研究逆转录病毒介导RANKL基因转染对骨髓间充质干细胞（BMSCs）RANKL、OPG表达的影响,探索RANKL基因转染增强BMSCs调控破骨细胞分化能力的可行性,为RANKL基因转染促进骨替代材料降解成骨作用的机制研究提供基础实验依据。方法:全骨髓差速贴壁法分离培养、纯化SD大鼠BMSCs,培养至第三代进行形态学、成骨、成脂分化鉴定。构建、鉴定携带RANKL基因重组逆转录病毒。设置RANKL转染组(BMSCs^RANKL)、空载转染组(BMSCs^{p BABE})、空白组（BMSCs）,RT-qPCR、WB检测重组逆转录病毒转染后RANKL过表达效果。用嘌呤霉素（puro）筛选、收获稳定转染细胞BMSCs^RANKL、BMSCs^pBABE。MTT法检测空白组、RANKL转染组、空载转染组细胞增殖活性;碱性磷酸酶（ALP）活性、ALP染色及茜素红染色法检测RANKL转染诱导组、空白诱导组、空白组细胞的成骨分化能力;RT-qPCR、WB检测RANKL基因转染BMSCs细胞3、7、14、21d三组RANK... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

骨髓间充质干细胞鉴定Figure1morphologyandmultidirectionalidentificationofBMSCsA：Gimesa染色形态学鉴定（40x）；B：成骨诱导21d光镜下见矿化钙结节（40x）；C：茜素红染色

pBABE-puro载体图谱

pBABE-RANKL-puro双酶切鉴定电泳图

【参考文献】：
期刊论文
[1]磷酸钙/聚乳酸羟基乙酸复合骨水泥对破骨前体细胞炎症因子表达的影响[J]. 陈娟娟,梁翠薇,叶财敏,覃媛,吴修团,谢柳蓉,李文良,廖红兵.  口腔医学. 2016(04)
[2]磷酸钙骨水泥凝固初期的钙磷降解规律探索及对RAW264.7细胞增殖影响的研究[J]. 覃媛,陆建志,张天,梁翠薇,陈娟娟,叶财敏,廖红兵.  口腔医学. 2015(03)
[3]RANKL,a necessary chance for clinical application to osteoporosis and cancer-related bone diseases[J]. Hisataka Yasuda.  World Journal of Orthopedics. 2013(04)
[4]间断流体力学对骨髓基质来源的成骨细胞分化及功能的影响[J]. 唐开,党耕町,郭昭庆.  中华医学杂志. 2002(10)



本文编号：3235385