小胶质细胞在PLP 139-151 诱导SJL小鼠EAE模型中的作用研究
发布时间：2021-06-23 20:52
目的观察髓鞘蛋白脂质蛋白139-151(proteolipid protein,PLP139-151)诱导SJL小鼠构建的复发缓解型的实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型复发期脑内小胶质细胞的病理改变。方法应用100μg、150μg PLP139-151多肽片段免疫SJL小鼠构建复发缓解型EAE模型（分别简称为100μg PLP组、150μg PLP组）,另设健康对照组（对照组;采用与实验组等体积溶媒处理）,观察35 d。观察两组EAE小鼠的发病情况及神经功能残疾进展评分差异,选择发病快、神经功能残疾进展评分高者（计为EAE组）观察复发期小胶质细胞活化情况。EAE组于复发期疾病高峰时,对照组于相同时间点,取小鼠大脑皮层组织,应用免疫组织化学（immunohistochemical,IHC）染色及免疫荧光（immunofluorescence,IF）染色比较两组小胶质细胞的活化情况。结果 150μg PLP组小鼠在两个发病高峰（分别为免疫第13、28天）均早于...
【文章来源】：中国神经免疫学和神经病学杂志. 2019,26(06)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
三组小鼠神经功能评分比较
动物模型为人类深入了解疾病发病机制及研发治疗药物提供了保障,MS实验动物模型有多种,包括病毒模型、化学毒素模型、EAE模型等。EAE模型是最常用的拟MS实验动物模型,能够较好模拟MS的临床表现、病理特征。目前常用的免疫原为髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)[7]、PLP、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelinoligodendrocyteglycoptein,MOG)等[8]。但无论是MBP或MOG多肽片段诱发的动物模型均以急性发作为主,急性期维持时间短且多为单相病程。由于在MS患者中,约80%～85%为复发缓解型,PLP诱发的动物模型具有维持时间长、复发缓解等特点,与临床MS的复发缓解病程更相似,能更好的模拟疾病状态。而既往针PLP诱导的EAE动物模型的研究,也多集中在第一次发病期,针对其复发期的研究鲜有报道。由于在MS患者中,约80%～85%为复发缓解型,因此针对疾病复发期的研究同样至关重要,本实验应用针对EAE研究的出现频率较高的两个剂量150 μg 和100 μg PLP139-151成功诱导SJL小鼠发病建立EAE模型,并且成功观察到疾病缓解复发的模拟临床过程。研究结果显示,150 μg PLP组小鼠在每个发病高峰均早于100 μg PLP组,且神经功能评分高于或等于100 μg PLP组。 为了深入研究疾病复发期时EAE小鼠较对照组小鼠的小胶质细胞的病理差异,本研究进一步观察了150 μg PLP139-151诱导的EAE模型缓解后二次复发时小胶质细胞的活化情况。图3 EAE模型组和对照组小鼠大脑皮层小胶质细胞（Iba-1标记）表达（IF×200)
图 2 EAE组和对照组小鼠大脑皮层Iba-1小胶质细胞(标记)表达(IHC×200)。小胶质细胞是中枢神经系统(central nervous system,CNS)的免疫监视细胞,相当于CNS内的巨噬细胞,是维持CNS免疫平衡的一道最主要防线。正常情况下,小胶质细胞处于静息态,当机体受到体内外异物侵袭时,小胶质细胞一方面迅速活化,释放大量的炎性因子、趋化因子、补体等,通过抗原呈递、吞噬、细胞/体液免疫等过程,及时清除异物的侵袭或者清理机体内死亡的细胞、碎屑等[9-11]。近年来研究发现小胶质细胞几乎参与了所有中枢神经系统炎性病变及退行性疾病,如阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化等[12-13],本研究观察到在PLP诱导的复发缓解型EAE小鼠在疾病复发期脑组织中存在着Iba-1+细胞的表达明显增多的现象,并且同时伴随小胶质细胞体积增大,突起增多等相关的形态改变,提示EAE模型中可能存在小胶质细胞活化状态(图2、3),这进一步提示在EAE发病过程中存在着小胶质细胞的参与。与既往针对MS发病过程中的小胶质细胞参与的研究是一致的,MS中小胶质细胞激活后主要通过Toll样受体活化下游通路,引起细胞内炎性介质释放,进而导致炎性反应的发生。MS尸检患者发现中枢神经系统白质病灶中存在大量淋巴细胞和巨噬细胞的浸润,提示MS病变用于中枢神经系统炎性反应相关,进而推测活化的小胶质细胞通过激发中枢神经系统炎性反应参与了MS的发病[14]。本实验中EAE小鼠大脑皮层病理染色观察到的小胶质细胞改变进一步表明PLP139-151成功诱导的EAE模型不仅在临床发病表现上与MS类似,也在病理表现上存在与MS相契合的现象,这些现象也进一步证实PLP诱导的EAE模型适用于MS的研究。
【参考文献】：
期刊论文
[1]多发性硬化动物模型研究进展[J]. 彭真,张礼标,吴洁,孙云霄. 动物医学进展. 2017(04)
[2]小胶质细胞极化在多发性硬化发病中的作用机制研究进展[J]. 张明,刘江红,洪浩,尹琳琳. 中国比较医学杂志. 2016(04)
[3]PLP不同肽段诱导EAE模型的对比研究[J]. 张金涛,金香兰,朱克,邢广羽,张笑明,万顺伦,宋春杰,尹岭. 中国神经免疫学和神经病学杂志. 2005(02)
本文编号：3245637
【文章来源】：中国神经免疫学和神经病学杂志. 2019,26(06)北大核心
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
三组小鼠神经功能评分比较
动物模型为人类深入了解疾病发病机制及研发治疗药物提供了保障,MS实验动物模型有多种,包括病毒模型、化学毒素模型、EAE模型等。EAE模型是最常用的拟MS实验动物模型,能够较好模拟MS的临床表现、病理特征。目前常用的免疫原为髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)[7]、PLP、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelinoligodendrocyteglycoptein,MOG)等[8]。但无论是MBP或MOG多肽片段诱发的动物模型均以急性发作为主,急性期维持时间短且多为单相病程。由于在MS患者中,约80%～85%为复发缓解型,PLP诱发的动物模型具有维持时间长、复发缓解等特点,与临床MS的复发缓解病程更相似,能更好的模拟疾病状态。而既往针PLP诱导的EAE动物模型的研究,也多集中在第一次发病期,针对其复发期的研究鲜有报道。由于在MS患者中,约80%～85%为复发缓解型,因此针对疾病复发期的研究同样至关重要,本实验应用针对EAE研究的出现频率较高的两个剂量150 μg 和100 μg PLP139-151成功诱导SJL小鼠发病建立EAE模型,并且成功观察到疾病缓解复发的模拟临床过程。研究结果显示,150 μg PLP组小鼠在每个发病高峰均早于100 μg PLP组,且神经功能评分高于或等于100 μg PLP组。 为了深入研究疾病复发期时EAE小鼠较对照组小鼠的小胶质细胞的病理差异,本研究进一步观察了150 μg PLP139-151诱导的EAE模型缓解后二次复发时小胶质细胞的活化情况。图3 EAE模型组和对照组小鼠大脑皮层小胶质细胞（Iba-1标记）表达（IF×200)
图 2 EAE组和对照组小鼠大脑皮层Iba-1小胶质细胞(标记)表达(IHC×200)。小胶质细胞是中枢神经系统(central nervous system,CNS)的免疫监视细胞,相当于CNS内的巨噬细胞,是维持CNS免疫平衡的一道最主要防线。正常情况下,小胶质细胞处于静息态,当机体受到体内外异物侵袭时,小胶质细胞一方面迅速活化,释放大量的炎性因子、趋化因子、补体等,通过抗原呈递、吞噬、细胞/体液免疫等过程,及时清除异物的侵袭或者清理机体内死亡的细胞、碎屑等[9-11]。近年来研究发现小胶质细胞几乎参与了所有中枢神经系统炎性病变及退行性疾病,如阿尔兹海默病、帕金森病、多发性硬化等[12-13],本研究观察到在PLP诱导的复发缓解型EAE小鼠在疾病复发期脑组织中存在着Iba-1+细胞的表达明显增多的现象,并且同时伴随小胶质细胞体积增大,突起增多等相关的形态改变,提示EAE模型中可能存在小胶质细胞活化状态(图2、3),这进一步提示在EAE发病过程中存在着小胶质细胞的参与。与既往针对MS发病过程中的小胶质细胞参与的研究是一致的,MS中小胶质细胞激活后主要通过Toll样受体活化下游通路,引起细胞内炎性介质释放,进而导致炎性反应的发生。MS尸检患者发现中枢神经系统白质病灶中存在大量淋巴细胞和巨噬细胞的浸润,提示MS病变用于中枢神经系统炎性反应相关,进而推测活化的小胶质细胞通过激发中枢神经系统炎性反应参与了MS的发病[14]。本实验中EAE小鼠大脑皮层病理染色观察到的小胶质细胞改变进一步表明PLP139-151成功诱导的EAE模型不仅在临床发病表现上与MS类似,也在病理表现上存在与MS相契合的现象,这些现象也进一步证实PLP诱导的EAE模型适用于MS的研究。
【参考文献】：
期刊论文
[1]多发性硬化动物模型研究进展[J]. 彭真,张礼标,吴洁,孙云霄. 动物医学进展. 2017(04)
[2]小胶质细胞极化在多发性硬化发病中的作用机制研究进展[J]. 张明,刘江红,洪浩,尹琳琳. 中国比较医学杂志. 2016(04)
[3]PLP不同肽段诱导EAE模型的对比研究[J]. 张金涛,金香兰,朱克,邢广羽,张笑明,万顺伦,宋春杰,尹岭. 中国神经免疫学和神经病学杂志. 2005(02)
本文编号：3245637
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