USP13敲除小鼠的制备与分析

发布时间：2021-07-10 17:31

　　病毒感染导致的各种疾病对人类生命安全和社会生产造成极大威胁。根据病毒的遗传物质组成,病毒可分为RNA病毒和DNA病毒。其中,DNA病毒以及逆转录RNA病毒在感染与复制的过程中产生的双链DNA（dsDNA）是一类重要的病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）,能被宿主编码的模式识别受体如cGAS,IFI16,DDX41等识别。这些模式识别受体或通过直接招募下游接头蛋白MITA（又叫做STING）或产生2’-3’cGAMP结合至MITA,导致MITA的寡聚化而活化。MITA随后招募下游蛋白激酶TBK1与转录因子IRF3,进而促进IRF3的磷酸化。研究表明,MITA的活性受到泛素化的严格调控,如RNF5催化MITA发生K48链接的泛素化以及蛋白酶体途径降解,而AMFR诱导MITA发生K27-链接的泛素化进而促进TBK1的招募。然而,对MITA的去泛素化调控则不是很清楚。我们筛选了与MITA相互作用的去泛素化酶,发现USP13与MITA有相互作用,初步研究结果表明,敲低USP13促进DNA病毒感染诱导I性干扰素的表达以及IRF... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

2cGAS-cGAMP-MITA信号通路(引自IUBMBLife.}39})

我们利用ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技术制备了?ＵＳＰ１３缺陷小鼠。ＰＣＲ测??序结果表明（／切基因的１号外显子插入了一个胞嘧啶从而发生了移码突变，??导致在第５６个氨基酸处翻译提前终止（图３．２ｂ）。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔｔｉｎｇ研究表明，??从该小鼠分离的骨髓细胞中没有ＵＳＰ１３基因的表达（图３．２ｃ）。这些结果表明，??我们实验所使用的ＵＳＰ１３缺陷（［／叹７３＿）小鼠确实不能正常表达基因。??在随后的实验中，我们分别在小鼠细胞水平和机体水平对ＵＳＰ１３作用于抗ＤＮＡ??病毒天然免疫信号通路的调控机制进行了探究。??４１??


本文编号：3276360