siRNA下调星形胶质细胞中PTEN表达对缺氧复氧诱导细胞凋亡影响

发布时间：2021-07-21 23:32

　　目的研究siRNA下调星形胶质细胞中第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）表达对缺氧复氧诱导的细胞凋亡影响。方法分离培养乳鼠星形胶质细胞,用携带PTEN siRNA的慢病毒载体感染星形胶质细胞,经缺氧复氧处理后,用Real time PCR和Western blot检测细胞中PTEN表达变化。MTT测定细胞增殖活力,二硝基苯肼比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,流式细胞术测定周期和凋亡变化,Western blot检测细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶4（Cdk4）、p21蛋白水平和胞质中细胞色素C（Cytochrome C）蛋白水平,JC-1法测定线粒体膜电位。结果携带PTEN siRNA的慢病毒载体感染后的星形胶质细胞中PTEN表达水平降低。缺氧复氧处理后的星形胶质细胞活力降低,细胞LDH漏出率升高,细胞凋亡率升高,细胞G1期比例升高,Cdk4蛋白水平降低,p21蛋白水平升高,胞质中Cytochrome C蛋白增多,线粒体膜电位降低。敲低PTEN可以提高缺氧复氧条件下星形胶质细胞活力,降低细胞LDH漏出率,减少G1期细胞比例,降低细胞凋亡率,促进细胞表达Cdk4蛋白,减少... 

【文章来源】：中国实用神经疾病杂志. 2019,22(23)

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

Western blot检测携带PTEN siRNA的慢病毒载体对缺氧复氧条件下星形胶质细胞中PTEN蛋白水平影响

表2 敲低PTEN对缺氧复氧条件下星形胶质细胞存活率和LDH漏出率影响 ( x ˉ ±s,%) Table 2 Effect of knockdown of PTEN on astrocyte survival rate and LDH leakage rate under hypoxia-reoxygenation conditions ( x ˉ ±s,%) 组别 存活率 LDH漏出率 Control 100.00 26.11±2.78 H/R 68.25±4.15& 59.42±2.47& si-NC+H/R 65.89±8.24 60.84±6.59 si-PTEN+H/R 79.22±5.11* 36.44±4.17* F值 26.134 47.529 P值 0.000 0.000 注:与Control比较,&P<0.05;与si-NC+H/R和H/R比较,*P<0.05图3 流式细胞术测定敲低PTEN对缺氧复氧条件下星形胶质细胞凋亡影响

图2 Western blot检测敲低PTEN对缺氧复氧条件下星形胶质细胞中周期相关蛋白Cdk4、p21表达影响表3 敲低PTEN对缺氧复氧条件下星形胶质细胞周期分布及Cdk4、p21蛋白水平影响 ( x ˉ ±s) Table 3 Effect of knockdown of PTEN on astrocyte cell cycle distribution and Cdk4,p21 protein levels under hypoxia-reoxygenation ( x ˉ ±s) 组别 G1(%) S(%) G2/M(%) p21 Cdk4 Control 60.14±5.17 27.45±2.24 12.41±1.05 0.26±0.02 0.68±0.06 H/R 78.26±4.23& 14.85±1.18& 6.89±0.78& 0.85±0.09& 0.41±0.03& si-NC+H/R 79.14±5.32 15.69±1.54 5.17±1.11 0.87±0.07 0.40±0.05 si-PTEN+H/R 68.76±2.56* 22.86±2.64* 8.39±1.47* 0.36±0.05* 0.51±0.02* F值 12.109 27.579 22.458 77.409 27.351 P值 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000 注:与Control比较,&P<0.05;与si-NC+H/R和H/R比较,*P<0.05


本文编号：3295983