巢式逆转录聚合酶链反应在轮状病毒型别鉴定中的适用性

发布时间：2021-07-31 12:22

　　目的以巢式逆转录聚合酶链反应（nested reverse transcription PCR, Nested-RT-PCR）鉴定轮状病毒型别,并对其适用性进行验证。方法提取轮状病毒基因组RNA,以逆转录聚合酶链反应（reverse transcription PCR, RT-PCR）扩增轮状病毒VP7基因序列,再以Nested-RT-PCR扩增各型别轮状病毒特异性目的基因片段,将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测其基因片段的大小,并与Genbank报道的相应基因序列片段预计大小进行对比,以确定各毒株的型别。分析该方法的特异性、灵敏度及准确性,对Nested-RT-PCR鉴定轮状病毒型别的适用性进行验证。结果 Nested-RT-PCR法可特异性扩增各型别轮状病毒特异性目的基因片段,所检测的轮状病毒型别特异性目的基因片段与Genbank报道的相应基因序列片段大小相符,可用于轮状病毒型别鉴定。适用性验证结果显示,此方法所用引物特异性好,能特异性扩增相应型别的轮状病毒目的基因片段;具有较高的灵敏度,可检出RNA质量浓度为0.5 ng/μL的样本,其检测灵敏度高于PrimeScriptTM One... 

【文章来源】：微生物学免疫学进展. 2020,48(02)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

Nested-RT-PCR和PrimeScriptTM One Step RT-PCR结果比对

G3型引物特异性分析

G4型引物特异性分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]有限稀释法筛选轮状病毒LD9株纯化方法的建立及应用[J]. 寇桂英,余黎,朱传凤,王名强,周旭.  中国新药杂志. 2012(10)
[2]轮状病毒基因重配LH9株（G4型）传代稳定性研究[J]. 包红,胡广宏,陈汉泉,寇桂英,周旭.  微生物学免疫学进展. 2009(03)
[3]人轮状病毒的细胞培养分离[J]. 白植生,方悦群,吴妙灵,申硕,郑元丰,靳毅,李文琦,吴明德,赵艺.  病毒学报. 1985(02)



本文编号：3313460