不同弹性模量静电纺丝聚氨酯纤维支架对兔纤维环干细胞分化的调控研究

发布时间：2021-08-09 16:53

　　目的：探讨兔纤维环沿径向不同区域的细胞形态、生化组成、基因表达及生物力学等方面的差异性。方法：获取6月龄新西兰白兔的椎间盘纤维环组织，将其沿径向分为内、中、外三个区，经胶原酶消化分离出各区纤维环原代细胞，比较各区细胞形态学差异，检测各区细胞的增殖情况，定量分析各区细胞I型胶原（Collagen-I）、II型胶原（Collagen-II）和聚集蛋白聚糖（Aggrecan）的基因表达，通过H&E、番红O-固绿染色、及Collagen-I和Collagen-II免疫组化染色考察各区组织中胶原和蛋白聚糖（PG）的分布，定量检测各区组织中DNA、糖胺聚糖（GAG）、羟脯氨酸（HYP）、Collagen-I和Collagen-II的含量，利用细胞牵引力显微术（Cell tractionforce microscope, CTFM）测定各区细胞的牵引力，通过纳米压痕和拉伸测试分别从微观和宏观方面测定各区组织的压应力和拉应力。结果：分离并培养得到纤维环内、中、外三区细胞，其中内区细胞主要呈圆形或类软骨细胞形态，外区细胞主要呈梭形或类成纤维细胞形态，中区细胞则具有内外区的混合细胞形态；三个区的细... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：144 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

椎间盘的结构和应力环境

紧贴棘突两侧骨质钝性分开竖脊肌至横突，显露 T10 - L5 椎体，将该段脊柱游离取出，剔除周围肌肉及韧带（图1-1A）。使用 11 号刀片完整取出各节段椎间盘（图 1-1B-C），将其放入含 5% 双抗的 α-MEM 培养液中。待各节段椎间盘取出后，移至超净工作台中，在连续变倍体视显微镜下使用显微外科手术剪将髓核移除，并进一步剔除纤维环周围的筋膜、肌肉、韧带、骨质及软骨终板，然后将纤维环按照含水量的多少将组织分成内区、中区及外区三组（图 1-1D-E），分别称重。图 1-1 椎间盘纤维环的提取及分区。 A：兔 T10-L5 脊柱节段及其之间的椎间盘；B：切取完整的椎间盘；C：获得的完整的椎间盘；D：剔除椎间盘周围组织后分区前的椎间盘；E：移除髓核（1），纤维环分为内区（2）、中区（3）和外区（4）。2.2 纤维环内、中、外区细胞的培养获得内、中、外区的纤维环组织后（图 1-1E），用无菌 PBS 溶液清洗，将其剪成约 1×1×1 mm3

不同弹性模量静电纺丝聚氨酯纤维支架对兔纤维环干细胞分化的m 处水平切断椎间盘，得到 L5 椎体和 L4-5 椎间盘（图 1-2A）。将椎间盘和椎蜡中，使椎间盘表面向上（图 1-2B）。米压痕测试准备好的样品，将其固定于 G200 Agilent 纳米压痕仪的载物台上（图 1-2C-D）要测试的纤维环内、中、外区域，每个区选择 10 个测试点（图 1-2E）。选取ies XP CSM flat punch complex modulus”操作模式，在 10, 5.62, 3.16, 1.78 和 1 赫 nm 的振幅下，使用直径 215 μm 平压头垂直纤维环的方向进行加载。测试环境在测试间隙向纤维环滴注少量 PBS 以保持组织的水分。


本文编号：3332443