基于FRET分子探针实时监测CB1受体激活及其生物活性研究

发布时间：2021-08-13 22:55

　　G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor,GPCR）家族成员大麻素受体1（Cannabinoid receptor 1,CB1）主要在神经系统中表达,CB1活化后参与调节学习、记忆、疼痛和能量代谢等过程。然而迄今为止,尚缺少直接监测CB1活化的方法。我们首先构建了CB1分子内荧光共振能量转移（Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET）分子探针,通过监测CB1受体的第三细胞内环（i3c-loop）和C末端之间的结构变化来监测其活化。为了监测CB1受体的激活及介导的下游信号转导通路,我们首先在CB1受体的C-末端融合青色荧光蛋白（eCFP）,并将黄色荧光蛋白（eYFP）直接插入i3c-loop中,从而构建完成第一个CB1受体FRET分子探针（p5-VSV-CB1-eYFP at 3-loop-M-eCFP,CB1-M）,对其生物学活性的研究表明,CB1激动剂能够时间和浓度依赖性的诱导受体分子探针内化、FRE信号增加,同时促进细胞内[Ca²⁺]增加,ERK1/2 MAP激酶磷酸化增强。此外,我们对... 

【文章来源】：昆明理工大学云南省

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【学位级别】：硕士

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G蛋白偶联受体的结构图

8图 1.2 大麻素受体的信号通路图Fig 1.2 Cannabinoid receptor signaling pathwayA 图为大麻素 1 型受体的信号通路图；B 图为大麻素 2 型型受体的信号通路图（图片引自大麻素-CB1 /CB2 受体系统对多巴胺神经元调节作用及其与帕金森病发生的研究进展）Cannabinoid receptor signaling pathwayFigure A shows the signal pathway of the cannabinoid type 1 receptor;Figure B shows the signal pathway of the cannabinoid type 2 receptor.1.2.5.1 CB1 介导的下游信号通路 ERK1/2ERK1/2（extracellular regulated protein kinases）是指细胞外调节蛋白激酶，包括 ERK1 和 ERK2，是将信号从表面受体传导至细胞核的关键激酶。ERK1/2是 80 年代末期发现的一类丝/苏氨酸蛋白激酶，是传递丝裂原信号的信号转导蛋白。它正常定位于胞浆，当激活后转位至胞核，调节转录因子活性，产生细胞效

昆明理工大学硕士学位论文骨架成份，如微管相关蛋白 MAP-1、MAP-2 和 MAP-4，参与细胞形态的调节及细胞骨架的重分布。最近，国外学者又新克隆出 ERK5 及其上游激酶 MEK5，这条 MAPKs 信号通路可被 H2O2及高渗刺激激活，其底物为 c-myc（图 3）。分子生物学技术发现还存在 ERK3Kinase/ERK3 及 ERK4 两条通路存在，但目前对其激活信号、底物及生物学意义还不清楚。


本文编号：3341277