TAT-LHRH修饰的壳聚糖/DNA纳米粒的细胞内吞途径的研究

发布时间：2021-09-03 21:38

　　随着分子生物学、细胞生物学和基因工程技术的进步,基因治疗成为一种新型治疗模式,在遗传性疾病、恶性肿瘤、心血管疾病、艾滋病等疾病的治疗中有着广阔的运用前景。基因治疗载体的选择是基因治疗成败的关键环节。基因治疗载体包括病毒载体、非病毒载体和细菌载体。非病毒载体具有较低的免疫原性、低细胞毒性、较大的基因负载量、制备简单等优点,显示了其作为基因治疗载体的优越性。本实验室前期工作表明,TAT-LHRH修饰的壳聚糖/DNA纳米粒（TLCDN）呈现出对HepG2较高的转染效率和靶向性,但其以何种方式进入细胞尚不清楚。本研究通过摄入抑制实验、共定位实验以及阻断不同细胞内吞途径对基因转染效率的影响三部分实验,旨在探索TAT-LHRH修饰的壳聚糖/DNA纳米粒的细胞内吞途径。采用复凝集法,将荧光标记的质粒DNA与TAT-LHRH修饰的壳聚糖或未经修饰的壳聚糖混合制备TLCDN和壳聚糖/DNA纳米粒（CDN）。观察3种内吞途径抑制剂chlorpromazine（CPM）、filipin（FP）或dynasore（DS）对HepG2细胞摄入TLCDN或CDN的影响,同时检测摄入抑制后的基因转染效率。再者,将T... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1. 基因治疗及其载体分类
        1.1. 病毒载体的分类及特点
        1.2. 非病毒载体的分类及特点
        1.3. 细菌载体分类及特点
        1.4. 小结
    2. 细胞内吞及细胞内吞途径分类
        2.1. 吞噬作用
        2.2. 网格蛋白依赖性细胞内吞
        2.3. 小窝蛋白介导的细胞内吞
        2.4. 非网格蛋白和非小窝蛋白依赖性细胞内吞
        2.5. 巨胞饮
        2.6. 小结
    3. 课题的提出
第二章 摄入抑制实验
    1. 试剂、耗材和仪器
        1.1. 试剂及耗材
        1.2. 仪器
    2. 主要试剂的配制
        2.1. 缓冲液配制
        2.2. 内吞途径抑制剂溶液的配置
        2.3. 其它溶液的配置
    3. 实验方法
        3.1. 质粒DNA pGL3-Control的提取及荧光标记
        3.2. TAT-LHRH-CS共聚物的制备
        3.3. 用TAT-LHRH-CS或CS和fDNA制备纳米粒
        3.4. 摄入抑制实验
        3.5. 统计学处理
    4. 结果与讨论
    5. 本章小结
第三章 共定位实验
    1. 试剂、耗材和仪器
        1.1. 试剂及耗材
        1.2. 仪器
    2. 主要试剂的配制
        2.1. 缓冲液配制
        2.2. 内吞途径标志物溶液的配置
        2.3. 其它溶液的配置
    3. 实验方法
        3.1. 质粒DNA pGL3-Control的提取及荧光标记
        3.2. TAT-LHRH-CS共聚物的制备
        3.3. 用TAT-LHRH-CS或CS和fDNA制备纳米粒
        3.4. 共定位实验
        3.5. 统计学处理
    4. 结果与讨论
    5. 本章小结
第四章 阻断不同细胞内吞途径对基因转染效率的影响
    1. 试剂、耗材和仪器
        1.1. 试剂及耗材
        1.2. 仪器
    2. 主要试剂的配制
        2.1. 缓冲液配制
        2.2. 内吞途径抑制剂溶液的配置
        2.3. 其它溶液的配置
    3. 实验方法
        3.1. 质粒DNA pGL3-Control的提取
        3.2. TAT-LHRH-CS共聚物的制备
        3.3. 用TAT-LHRH-CS或CS和DNA制备纳米粒
        3.4. 阻断不同内吞途径对基因转染效率的影响
        3.5. 统计学处理
    4. 结果与讨论
    5. 本章小结
全文总结
参考文献
附录：文中所用到的主要实验方法
    1. HepG2细胞的复苏、传代及保存
        1.1. HepG2细胞的复苏
        1.2. HepG2细胞的传代
        1.3. HepG2细胞的保存
    2. 含质粒DNA pGL3-Control的大肠杆菌DH5a的培养
    3. 质粒DNA pGL3-Control的提取
    4. 质粒DNA pGL3-Control的荧光标记
    5. 荧光素酶检测
    6. BCA法测定细胞蛋白含量
致谢



本文编号：3381899