基于iTRAQ技术的结核分枝杆菌定量蛋白质组学研究

发布时间：2021-09-05 05:25

　　结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb,简称结核杆菌）是结核病的主要致病菌。艾滋病合并结核病和耐多药结核病使得结核病的诊断和治疗成为全球面临的重大挑战。寻找结核杆菌新标识分子用于结核病诊断或疫苗候选抗原具有重要意义,分子标识的研究方法包括基因水平和蛋白质水平,蛋白质组学是在蛋白质水平发现分子标识的重要途径之一。定量蛋白质组学技术--相对和绝对定量的等量异位标签（isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ）技术结合Nano-LC-MS/MS,对临床分离的结核杆菌链霉素（SM）耐药株01108、SM敏感株01105和H37Rv的全菌体蛋白进行定量蛋白质组学研究,通过相对定量分析SM耐药株与敏感株间的差异蛋白质,基于巴斯德研究所功能分类树,对两组差异蛋白进行相对分子量、等电点、酶分类以及功能分类分析,并根据差异蛋白理论分子量和等电点绘制了虚拟2D凝胶。同时,WEGO在线对差异蛋白进行功能注释聚类分析,并运用KEGG对蛋白参与的信号通路进行分析。SM耐药株01108与SM敏感株01... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 蛋白质组学研究技术
    1.2 结核分枝杆菌蛋白质组学研究进展
第二章 基于iTRAQ技术的结核分枝杆菌定量蛋白质组学研究
    2.1 前言
    2.2 材料
        2.2.1 菌株
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 主要仪器设备
    2.3 方法
        2.3.1 菌株特征鉴定
        2.3.2 全菌体蛋白质的提取
        2.3.3 Bradford法测定蛋白质浓度
        2.3.4 双向电泳检测全菌体蛋白
        2.3.5 蛋白质的复溶及还原烷基化
        2.3.6 蛋白质的消化及PMF检测消化效率
        2.3.7 iTRAQ 8 plex试剂标记肽段
        2.3.8 半制备型HPLC分离肽段
        2.3.9 C_(18)反相色谱柱除盐
        2.3.10 Nano-LC分离肽段及质谱鉴定
        2.3.11 生物信息学分析
    2.4 结果
        2.4.1 菌株特征
        2.4.2 菌体蛋白定量及电泳检测
        2.4.3 MALDI-TOF检测消化及标记效率
        2.4.4 半制备型HPLC分离肽段
        2.4.5 差异蛋白质鉴定及相对定量
        2.4.6 差异蛋白理化性质
        2.4.7 差异蛋白虚拟2D-gel
        2.4.8 差异蛋白质功能分析
        2.4.9 差异蛋白功能聚类分析
    2.5 讨论
小结
参考文献
致谢
发表论文


【参考文献】：
期刊论文
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[2]结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株亚细胞蛋白质组差异研究[J]. 陆晔,林成招,胡衡,梅建,武洁,沈鑫.  中华微生物学和免疫学杂志. 2011 (08)
[3]应用8标iTRAQ技术结合2D LC-MS/MS分析大鼠再生肝的差异蛋白质组[J]. 张一甫,秦兆宇,刘晓慧,林成招,贺福初.  分析测试学报. 2010(05)
[4]结核分枝杆菌耐异烟肼菌株与敏感菌株的比较蛋白质组学研究[J]. 姜昕,高峰,张文宏,胡忠义,王洪海.  中华结核和呼吸杂志. 2007(06)
[5]结核分枝杆菌培养物不同组份蛋白质组研究[J]. 庄玉辉,何秀云,张小刚,李国利,阙海萍,刘绍军.  微生物学报. 2002(03)
[6]重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值[J]. 张小刚,庄玉辉,何秀云,熊志红,董恩军,李书琳,张永胜,李昕.  中国防痨杂志. 2001(05)



本文编号：3384761