骨质疏松疫苗载体:Qβ病毒样颗粒的表达、鉴定和纯化

发布时间：2021-09-05 21:46

　　目的优化表达和纯化方式,制备出具有正确空间结构且纯度和产量较高的骨质疏松疫苗载体Qβ病毒样颗粒（Qβvirus-like particles,Qβ-VLPs）。方法在基因合成时删除A1基因序列中Qβ衣壳蛋白终止密码子之后的序列,只合成Qβ衣壳蛋白的基因序列。将Qβ衣壳蛋白基因序列克隆到p ET30a载体质粒上,用BL21（DE3）、BL21（DE3） p Lys S、Rosetta（DE3）三种不同菌株进行蛋白表达,然后用SDS-PAGE和透射电镜验证是否表达出Qβ-VLPs的正确结构。设置2个蛋白表达诱导剂IPTG（Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）浓度和3种菌体破碎方式,分别优化蛋白表达条件和菌体破碎方案,然后将得到的Qβ-VLPs上清液通过硫酸铵聚沉、高速离心和分子筛分选进行Qβ-VLPs的纯化。结果仅BL21（DE3） p Lys S菌株可以表达出SDS-PAGE中呈现5-6聚体、透射电镜下呈现25～30 nm球形结构的Qβ-VLPs。使用0. 5 m M浓度的IPTG表达的Qβ-VLPs产量较0. 2 m ... 

【文章来源】：武警医学. 2019,30(11)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 设计
    1.2 时间及地点
    1.3 材料
        1.3.1 菌株与质粒
        1.3.2 试剂及仪器
    1.4 实验方法
        1.4.1 目的质粒的扩增及小量提取
        1.4.2 Qβ-VLPs蛋白的表达和鉴定
        1.4.3 BL21(DE3)p LysS菌株表达条件的优化
        1.4.4 菌体破碎方式的优化
        1.4.5 Qβ-VLPs蛋白的纯化
2 结果
    2.1 不同菌株表达Qβ-VLPs结果
    2.2 Qβ-VLPs表达条件的优化
    2.3 菌体破碎方式对蛋白产量和纯度的影响
    2.4 Qβ-VLPs的纯化结果
3 讨论



本文编号：3386141