流感病毒为载体重组病毒株rHCV/FLU的构建及初步评价

发布时间：2021-10-08 14:18

　　目的构建及拯救以流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株r HCV/FLU并对其进行评价。方法利用反向遗传学技术,选择流感病毒A/Puerto Rico/8/34（PR8）为载体,将HCV 1b亚型的E1抗原基因经序列优化插入到PR8流感病毒NS1片段的特定位置,构建重组质粒p NS1-HCV,测序正确的重组质粒p NS1-HCV与PR8的7个重组质粒p HW191-PB2、p HW192-PB1、p HW193-PA、p HW194-HA、p HW195-NP、p HW196-NA、p HW197-M转染共培养的COS-1和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株,命名为r HCV/FLU,并通过血凝试验、RT-PCR、Western blot、电镜观察病毒形态等方法对重组病毒鉴定。接着,重组病毒接种SPF鸡胚扩大培养、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化。纯化获得的重组病毒抗原,滴鼻免疫Balb/c小鼠,0 d、14 d免疫2次,设置104TCID50、105TCID50、106TCID503个剂量组,初步评价其免疫效果。结果成功拯救重组病毒株... 

【文章来源】：免疫学杂志. 2016,32(01)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1质粒、细胞、病毒、鸡胚及动物
    1.2主要试剂及仪器
    1.3重组pNS1-HCV质粒构建及鉴定
    1.4 重组病毒拯救
    1.5 重组病毒株的鉴定
        1.5.1血凝试验
        1.5.2 RT-PCR基因鉴定
        1.5.3电镜观察
        1.5.4 Western blot鉴定
    1.6 重组病毒r HCV/FLU在MDCK细胞中的生长曲线
    1.7 重组病毒株r HCV/FLU动物免疫及效果评价
        1.7.1 重组病毒株r HCV/FLU的制备
        1.7.2动物分组
        1.7.3 动物免疫及检测
    1.8 血清抗体检测
    1.9 细胞因子检测
    1.10 统计学分析
2 结果
    2.1 重组质粒p NS1-HCV的构建
    2.2重组病毒株rHCV/FLU病毒的拯救
    2.3 Western blot鉴定
    2.4 电镜观察重组病毒r HCV/FLU
    2.5 RT-PCR基因鉴定
    2.6重组病毒rHCV/FLU在MDCK细胞的生长曲线
    2.7 重组病毒r HCV/FLU能够有效提高血抑抗体效价
    2.8 重组病毒r HCV/FLU诱导HCV/E1 特异性的细胞因子
3 讨论



本文编号：3424330