人源乳腺癌小鼠异种移植模型建立的研究

发布时间：2021-10-08 19:09

　　背景:乳腺癌是中国女性中最常见的癌症和第五大癌症死亡原因,近年来发病率有所上升。虽然乳腺癌的治疗手段非常丰富,但由于肿瘤异质性和患者个体的差别,一些患者的远期预后不尽如人意。为了提高乳腺癌患者的长期生存率,一种新的保留肿瘤内异质性的转化研究模型是必不可少的。人源肿瘤异种移植（patient-derived xenografts,PDX）模型已经成为转化研究和肿瘤学临床前试验的工具。方法:制定纳入标准,收集自2017年1月至9月共11例于我院手术的乳腺癌患者的新鲜肿瘤组织,先进行肿瘤组织消化、肿瘤细胞镜下观察,肿瘤细胞丰富的组织直接进行NOG（NOD/Shi-scid,IL-2R null）小鼠原位接种,肿瘤细胞稀少的组织进行3D培养（patient-derived organoids,PDOs）。患者标本转接后90天仍无生长迹象的视为实验失败,若肿瘤体积达到500 mm3以上小鼠,则取下肿瘤组织进行传代。定期测量小鼠体重与肿瘤体积。同时根据测量结果绘制小鼠体重曲线与肿瘤生长曲线。所有肿瘤组织均进行HE染色及免疫组织化学分析。结果:本研究成功建立PDX模型3例,成功率为27.27%。小鼠... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

镜下肿瘤细胞计数(A100倍镜下肿瘤细胞丰富的肿瘤组织；B20倍镜下肿瘤细胞稀少的肿瘤组织)

μlMatrigel 中，充分混匀后每次吸取 50μl，接种到 12 孔培养板。室温静置 5min，细胞培养箱 37℃培养 15min。后每孔加 3 ml Organoid growth Media，放置 37℃的 5%CO2细胞培养箱中培养，每隔 2-3 天换液。当 70-80%的细胞生长成肿瘤团，可进行传代、小鼠原位种植或冻存。图 1-1 镜下肿瘤细胞计数(A100 倍镜下肿瘤细胞丰富的肿瘤组织；B 20 倍镜下肿瘤细胞稀少的肿瘤组织)

在接种前一天，在生物安全柜中将 5 只实验小鼠剪脚趾编号，并记录每只老鼠的体重，而后将手术器械（包括手术剪、手术镊以及转接针）进行高压灭菌处理。接种时，取 3-4 个培养皿，分别加入 PBS 缓冲液、RPMI-1640 培养液、75%酒精，然后将事先灭菌的手术器械放入 75%酒精中，将肿瘤标本从器官保存液中取出放入PBS 缓冲液中冲洗 1-2 遍，转移至 RPMI-1640 培养基内（图 1-2），然后用手术剪剪切成 3*3*3mm3大小的肿瘤组织块，将剪好肿瘤组织块装入接种针内。将乳腺癌组织块 2-3 块接种于小鼠的乳垫原位（图 1-3），接种完成后，将接种针放入呈有酒精的培养皿中，接下来准备接种下一个点，每只接种 4 个点（右前、左前、右后、左后）直到 4 个点接种完成后，将小鼠放回鼠笼中，开始下一只小鼠接种，5 只小鼠都接种完成后，视为造模过程完成。建模完成后，用套管针在小鼠颈部侧面的皮下植入雌二醇缓释片（17β-Estradiol，0.36mg，60 天缓释）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]人源肿瘤异种移植模型在精准肿瘤医学中的研究进展[J]. 李克娟,黄昊,高苒.  中国比较医学杂志. 2017(01)
[2]人乳腺癌PDX模型的研究进展[J]. 马丽君,战军,张宏权.  中国科学:生命科学. 2016(06)



本文编号：3424786