干细胞因子SCF通过抑制AKT/mTOR信号通路促进脂肪干细胞的成骨分化

发布时间：2021-10-10 17:14

　　目的:间充质干细胞在细胞治疗以及重建医学中具有重要的意义。人脂肪组织来源的干细胞具有较低的供体发病率、良好的可塑性、产量高等特点,使得它在骨重建过程中成为可靠的细胞种子来源。而提高脂肪干细胞的成骨分化能力能使得它更好地治疗骨损伤。本研究利用干细胞因子处理脂肪干细胞并进行相关的成骨机制方面的研究,探讨了AKT/m TOR信号通路对脂肪干细胞成骨的调控作用。方法:（1）采用I型胶原酶消化法从脂肪组织中分离得到脂肪干细胞,利用油红-O检测其成脂能力以及利用茜素红染色检测其成骨能力,利用流式细胞术鉴定其表面标记物;（2）利用干细胞因子处理脂肪干细胞,通过MTT检测不同浓度的干细胞因子对脂肪干细胞的增殖影响作用。通过荧光定量PCR以及茜素红染色、碱性磷酸酶染色检测脂肪干细胞在不同时间段的成骨情况;（3）荧光定量PCR、茜素红染色、碱性磷酸酶染色以及western blotting实验分析干细胞因子调控脂肪干细胞成骨的机制。结果:（1）从脂肪组织中提取的脂肪干细胞能够进行贴壁生长、成脂成骨分化,细胞表面阳性表达CD105,CD73和CD90,而不表达CD45,CD34,CD14和HLA-DR;（2... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
中英文缩略语表
第一章 前言
    1.1 脂肪干细胞概述
    1.2 脂肪干细胞的应用
        1.2.1 脂肪干细胞在骨疾病方面的应用
        1.2.2 脂肪干细胞在其它方面的应用
    1.3 干细胞因子
        1.3.1 干细胞因子的生物学特征
        1.3.2 干细胞因子在骨疾病方面的应用
    1.4 AKT/mTOR信号通路
    1.5 本研究的目的及意义
第二章 试验材料与方法
    2.1 材料与仪器
        2.1.1 细胞
        2.1.2 主要的仪器和设备
        2.1.3 试剂与耗材
    2.2 主要溶液配制
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 成骨诱导分化
        2.2.3 成脂诱导分化
        2.2.4 Western blotting
    2.3 实验方法
        2.3.1 脂肪干细胞的分离提取流程
        2.3.2 ASCs的传代
        2.3.3 ASCs的冻存
        2.3.4 SCF对ASCs的增殖测试（MTT法）
        2.3.5 ASCs成骨分化操作流程
        2.3.6 茜素红染色
        2.3.7 碱性磷酸酶染色
        2.3.8 ASCs的成脂分化操作流程
        2.3.9 油红-O染色
        2.3.10 实时荧光定量RT-qPCR法
        2.3.11 相关蛋白的检测
        2.3.12 统计学分析
第三章 实验结果与分析
    3.1 提取与鉴定人脂肪组织中的脂肪干细胞（ASCs）
    3.2 干细胞因子（SCF）对ASCs的增殖、分化及干性的作用
    3.3 SCF对ASCs成骨分化的作用
        3.3.1 SCF对ASCs成骨分化的作用浓度
        3.3.2 SCF在ASCs成骨分化过程中的影响
    3.4 抑制AKT/mTOR信号通路能够促进SCF对ASCs成骨分化的作用
    3.5 讨论
第四章 结论与展望
    4.1 全文总结
    4.2 创新之处
    4.3 展望
参考文献
硕士期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]TGF-β/BMP signaling and other molecular events: regulation of osteoblastogenesis and bone formation[J]. Md Shaifur Rahman,Naznin Akhtar,Hossen Mohammad Jamil,Rajat Suvra Banik,Sikder M Asaduzzaman.  Bone Research. 2015(01)
[2]干细胞因子促进牙髓干细胞增殖与骨向分化能力[J]. 辛红,陈润良,裴英波.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(14)



本文编号：3428808