9型腺相关病毒介导CaMEK基因转染增强心肌细胞ERK1/2通路表达活性的研究

发布时间：2021-10-11 09:18

　　目的：以重组9型腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus serotyoe9，rAAV9）为载体介导CaMEK基因转染心肌细胞，观察是否能增强心肌细胞ERK1/2通路表达活性，进而减轻心肌细胞凋亡，促进细胞存活。方法：分离培养乳鼠心肌细胞，用含不同启动子的rAAV9转染分离所得心肌细胞，流式细胞仪及Western blot测定各组细胞的转染效率，选择适宜启动子，并检测rAAV9的心肌特异性转染。rAAV9介导CaMEK基因转染心肌细胞，Western blot检测各组细胞ERK1/2通路相关蛋白及转录因子的表达，免疫荧光定位检测ERK1/2通路相关信号分子的转位激活。星胞菌素诱导心肌细胞凋亡，Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达，Hoechst33342染色从形态学上评价各组细胞凋亡状况。结果：（1）流式结果显示CBA启动子和CMV启动子介导的rAAV9在心肌细胞的转染效率分别为（91.5±1.0）%和（73.2±1.3）%（P＜0.05），Western blot结果显示rAAV9-CBA-eGFP组eGFP蛋白的表达明显强于... 

【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
材料与方法
    1 材料
        1.1 主要仪器设备
        1.2 主要试剂及材料
        1.3 主要试剂配制
    2 方法
        2.1 原代乳鼠心肌细胞的分离培养及鉴定
        2.2 含不同启动子的 rAAV9 载体介导 eGFP 基因转染乳鼠心肌细胞表达效率的差异
        2.3 AAV9-CBA-eGFP 介导的心肌细胞特异性转染及转染后表达高峰的测定
        2.4 AAV9 介导 CaMEK 基因转导心肌细胞 ERK1/2磷酸化水平及转录因子表达的测定
        2.5 AAV9 介导 CaMEK 基因转染减轻星胞菌素（staurosporine，STS）诱导的心肌细胞凋亡的检测
        2.6 统计学方法
结果
讨论
小结
致谢
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士期间发表的学术论文
个人简历
导师评阅表



本文编号：3430228