基于nano LC-LTQ-Orbitrap-MS/MS的香附四物汤干预原发性痛经模型小鼠卵巢组织差异表达蛋白筛选

发布时间：2021-10-19 07:52

　　采用nano LC-LTQ-Orbitrap-MS/MS蛋白质组学方法筛选鉴定香附四物汤干预原发性痛经模型小鼠卵巢组织中的差异表达蛋白,推测香附四物汤治疗原发性痛经的机制。采用雌激素和缩宫素联合造成原发性痛经模型,给药组连续灌胃给予香附四物汤3 d,于末次给药后1 h,取卵巢,经蛋白提取、变性、还原、烷基化、脱盐、酶解后,进行nano LC分离并在线连接电喷雾串联Orbitrap质谱分析,利用Thermo Proteome discoverer 1.4进行数据处理,筛选并鉴定差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行生物信息学分析。随后采用Western blot法,将重要差异蛋白进行验证。正常组、模型组、给药组3组共有的差异蛋白106个,参与细胞过程的蛋白所占比例较大,其所参与的黏着连接、黏着斑等信号通路对细胞内各种信号通路均有调节作用。验证的ADRM1蛋白在模型组中,较正常组表达上调;给药后,较模型组表达下调。通过有效的比较分析,得到一些香附四物汤干预原发性痛经的差异表达蛋白,其中ADRM1蛋白有可能是香附四物汤作用的靶点。 

【文章来源】：中国中药杂志. 2016,41(16)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

正常组(A)、模型组(B)、给药组(C)小鼠卵巢蛋白总离子流图

生物调节(biologi-calregulation)、细胞成分组织(cellularcomponentor-ganization)、细胞成分组织或生源(cellularcompo-nentorganizationorbiogenesis)、细胞发展进程(cellu-lardevelopmentalprocess)、单个有机体细胞进程(single-organismcellularprocess)、细胞过程调节(regulationofcellularprocess)、细胞器组织(organ-elleorganization)、细胞变异(celldifferentiation)、神经变异调节(regulationofneurondifferentiation)、蛋白质复合体亚基组织(proteincomplexsubunitorgan-ization)等17个生物学过程，见表1，图2。表13组共有的部分差异表达蛋白Table1Comparisonofdifferentiallyexpressedproteinsinovaryduringnormal，modelandXiangfuSiwudecoctiongroup(part)蛋白编号描述ratioStdDevP趋势ABABABABA2A4A6phosphoinositidephospholipaseC1.650.340.670.483.0×10－29.2×10－3上调下调Q8BMC3SHC-transformingprotein21.750.451.311.305.6×10－33.1×10－2上调下调Q8CDI9hormone-sensitivelipase1.840.610.550.592.6×10－21.5×10－4上调下调Q8CIH51-phosphatidylinositol4，5-bisphos-phatephosphodiesterasegamma-20.182.390.370.581.0×10－21.4×10－2下调上调Q8VHX6filamin-C1.590.440.480.646.1×10－37.5×10－3上调下调Q9JKV1proteasomalubiquitinreceptorAD-ＲM12.440.460.990.612.5×10－42.6×10－2上调下调Q9QY76vesicle-associatedmembranepro-tein-associatedproteinB0.511.560.690.814.9×10－33.3×10－2下调上调注:A.模型组与正常组相比;B.香附四物汤给药组与模型组相比。图2差异蛋白涉及的生物学过程Fig.2Thebiologicalprocessesinvolv

gnalingpathway)、白细胞跨内皮迁移(leukocytetransendothelialmigration)、神经退行性失调(neurodegenerativeDisorders)、磷脂酰肌醇信号系统(phosphatidylinositolsignalingsystem)、嘧啶代谢(pyrimidinemetabolism)、紧密连接(tightjunc-tion)、三羧酸循环(citratecycle)等信号通路。采用Westernblot法，对卵巢样本(正常对照组、模型组和给药组各6个)中的蛋白ADＲM1(ad-hesion-regulatingmolecule1)进行了验证，见图3，表2。以灰度值的平均值计，正常对照组表达量为1，模型组表达量为1.81，给药组表达量为1.20。图3Westernblot法验证ADＲM1蛋白Fig.3VerificationofADＲM1byWesternblot·3063·

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于生物质谱的蛋白质定量技术及其在药代动力学研究中的应用[J]. 吴梦秋,陆高远,邵畅,王单单,孙迪,郝海平,王广基,叶慧.  中国药科大学学报. 2015(02)
[2]用于妇科血瘀证原发性痛经的四物汤类方主要活性成分网络药理学分析[J]. 刘培,段金廒,白钢,宿树兰.  中国中药杂志. 2014(01)
[3]香附四物汤对小鼠脾淋巴细胞增殖转化影响的效应物质基础研究[J]. 刘培,段金廒,洪敏,赵金龙.  中国实验方剂学杂志. 2012(23)
[4]香附四物汤对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响及活性部位成分分析[J]. 禹良艳,华永庆,刘培,宿树兰,段金廒.  南京中医药大学学报. 2011(03)
[5]微透析-HPLC-ECD联用技术用于香附四物汤对大鼠脑内5-HIAA动态变化的评价（英文）[J]. 刘培,段金廒,刘睿,郭建明,唐于平.  中华中医药杂志. 2011(05)
[6]大学女生中医体质与原发性痛经的相关性研究[J]. 郑良琴,毕建璐,占春旺,邓卫,林家省,罗仁,赵晓山.  中医药导报. 2011(01)
[7]香附四物汤与四物汤对急性血瘀模型大鼠血液流变性及卵巢功能的影响[J]. 刘培,宿树兰,周卫,刘立,朱敏,唐于平,段金廒.  中国实验方剂学杂志. 2010(08)
[8]蛋白质组学技术及其在中药复杂体系研究中的应用[J]. 刘璇,岳庆喜,果德安.  中国天然药物. 2009(04)



本文编号：3444461