rFliC诱导同种移植免疫耐受的作用及机理研究

发布时间：2021-10-23 02:40

　　研究目的目前,同种器官移植已在临床广泛开展,对治疗器官衰竭、血液疾病以及恶性肿瘤发挥了不可替代的作用。然而发生于移植术后数周或数月的急性排斥反应（AR, Acute rejection）仍是导致治疗失败的主要因素。移植术后常规使用的免疫抑制性药物严重降低了患者机体的免疫功能,导致了感染、肝肾损伤,影响了移植受者的预后。为解决这一难题,研究者们利用多种细胞和生物因子及制剂,通过不同途径诱导机体产生特异性的免疫耐受以克服非特异性的免疫抑制剂的严重毒副作用。目前移植免疫耐受研究的热点之一是扩增调节性T细胞（Regulatory T cell, Treg）或增强其功能。既往研究表明,Treg细胞是参与维持外周耐受的重要细胞,应用Treg细胞诱导免疫耐受具有多种优势,因而有可能被发展为诱导移植免疫耐受和治疗器官移植排斥的重要工具细胞。目前体外扩增的Treg进行细胞治疗方案的应用受到很多因素制约,而应用药物扩增受体机体内的Treg细胞比例或者增强Treg细胞抑制能力的方案具有更好的应用前景。人体内的Treg细胞主要存在于CD4+CD25hi（高表达）细胞亚群中,约占外周血CD4+T细胞的1%～2%... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：154 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
目录
CONTENTS
中文摘要
ABSTRACT
符号说明
序言
第一部分 rFliC对小鼠同种皮肤移植物的影响及与TLR5表达的相关性
    前言
    材料和方法
        一、实验材料
        二、实验仪器
        三、实验方法
            1. 小鼠同种皮肤移植模型的构建
            2. 基因重组鞭毛蛋白(rFliC)的制备
            3. SDS-PAGE鉴定提取纯化的rFliC
            4. Western blot鉴定提取纯化的rFliC
            5. 移植物病理(HE)染色
            6. 移植物免疫组化(IHC)染色
    实验结果
        一、成功构建小鼠同种皮肤移植模型
        二、成功制备高纯度rFliC
        三、rFliC对小鼠同种皮肤移植物生存的影响
            1. rFliC对同种皮肤移植物生存期的影响
            2. rFliC对同种皮肤移植物组织病理变化的影响
        四、rFliC体内处理对同种皮肤移植物TLR5表达的影响
    讨论
第二部分 rFliC对小鼠同种移植受体Treg细胞的影响
    前言
    材料和方法
        一、实验材料
        二、实验仪器
        三、实验方法
            1. 流式细胞术检测同种移植受体CD4~+CD25~+Foxp3~+细胞比例
            2. 免疫组化染色观察移植受体脾细胞Foxp3表达情况
            3. qRT-PCR检测同种移植受体Treg相关分子表达
            4. Western blot检测移植受体Treg相关分子表达
            5. 移植受体Treg细胞增殖实验
            6. 移植受体Treg细胞抑制功能实验
            7. 制备同种抗原
            8. 半定量RT-PCR检测同种抗原刺激的Treg细胞分子表达
            9. Western blot检测同种抗原刺激的Treg细胞分子表达
            10. 同种抗原刺激的Treg细胞增殖实验
            11. 同种抗原刺激的Treg细胞抑制功能实验
    实验结果
        一、rFliC对同种移植受体CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的影响
            1. rFliC对移植受体CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例的影响
            2. rFliC对移植受体Treg细胞Foxp3表达的影响
        二、rFliC对移植受体Treg细胞相关分子表达的影响
        三、rFliC对移植受体Treg细胞功能的影响
            1. rFliC对移植受体Treg细胞增殖的影响
            2. rFliC对移植受体Treg细胞抑制功能的影响
        四、rFliC体外处理对同种抗原刺激的Treg细胞分子表达的影响
        五、rFliC体外处理对同种抗原刺激的Treg细胞活性的影响
            1. rFliC对同种抗原刺激的Treg细胞增殖的影响
            2. rFliC对同种抗原刺激的Treg细胞抑制功能的影响
    讨论
第三部分 rFliC对同种抗原激活的Treg细胞Foxp3表达影响的分子机理与调控
    前言
    材料和方法
        一、实验材料
        二、实验仪器
        三、实验方法
            1. 检测rFliC对Treg细胞JNK、p38 MAPK信号的活化情况
            2. 检测rFliC活化Treg细胞JNK/p38 MAPK信号与Foxp3表达的相关性
            3. 检测rFliC对Treg细胞PI3K-Akt信号活化情况
            4. 检测Treg细胞中rFliC激活的PI3K-Akt信号对p38 MAPK活化的影响
            5. 检测rFliC激活的PI3K-Akt信号与Foxp3表达的相关性
            6. 检测rFliC激活的PI3K-Akt/p38 MAPK信号与Foxp3表达的相关性
    实验结果
        一、rFliC对同种抗原刺激Treg细胞JNK/p38 MAPK信号的影响
        二、rFliC上调同种抗原刺激Treg细胞的Foxp3表达与p38活化相关
        三、rFliC对同种抗原刺激Treg细胞PI3K-Akt信号的影响
        四、rFliC-同种抗原刺激Treg细胞PI3K信号对p38 MAPK信号活化的影响
        五、PI3K对rFliC-同种抗原激活Treg细胞的p38-Foxp3通路的影响
    讨论
全文小结
论文创新点
附图表
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录
攻读学位期间参与科研项目情况
攻读学位期间获奖励情况
已发表SCI论文
待发表SCI论文
学位论文评阅及答辩情况表


【参考文献】：
期刊论文
[1]Total body irradiation of donors can alter the course of tolerance and induce acute rejection in a spontaneous tolerance rat liver transplantation model[J]. ZHANG YeWei 1, ZHAO HeWei 1 , BO Lin 2 , YANG YinXue 3 , LU Xiang 4 , SUN JingFeng 1 , WEN JianFei 1 , HE Xia 5 & YIN GuoWen 6 1 Department of Hepatobiliary and Pancreatic Surgery, Affiliated Jiangsu Cancer Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210009, China; 2 Department of Rheumatism and Immunology, Affiliated No. 2 Hospital of Suzhou University, Suzhou 215000, China; 3 Department of General Surgery, Affiliated Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China; 4 Department of Geriatrics, The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210011, China; 5 Department of Radiotherapy, Affiliated Jiangsu Cancer Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210009, China; 6 Department of Interventional, Affiliated Jiangsu Cancer Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210009, China.  Science China（Life Sciences）. 2012(09)



本文编号：3452314